olympus荧光显微镜的应用要点

荧光显微镜是利用“光化荧光”成像，如果所选激发波长在肉眼所看不见的近紫外光区(320～400nm)，荧光的发射光谱也较普通光镜光源的平均波长短，光学分辨率提高。高能量的光子与电子碰撞，使得电子从基态跃迁到激发态。激发态的电子很不稳定，会重新回落到基态，这个过程中会消耗部分热能，并发出新的光子。新的光子能量比起初的光子能量低，因此波长更长。由于新的光子波长区别于入射光的光子波长，通过一定的光学处理方法将两束不同波长的光分开，从而使我们只看到发射出来的新光子（荧光信号），也就是olympus荧光显微镜看到的荧光图像。

　　olympus荧光显微镜的预检查和调节：

　　(1)每次进行荧光观测前，必须例行检查荧光装置的灯丝对中、光路对焦、孔径光阑、视场光阑设置等状况。

　　(2)所需要的荧光激发/发射滤光片组件是否已装在转换器中，olympus荧光显微镜物镜配置是否得当，除去物镜前透镜的油渍和灰尘。

　　(3)如同时进行透射光相差观察，要检查聚光镜对中心及相差环与物镜相反的共轭情况。

　　(4)检查样品载体(载玻片、盖玻片和其他器皿)有否挂有液体、灰尘，厚度是否在物镜标定的工作距离范围内。切片样品不能太厚，约≤10μm为宜。

　　(5)因照明光源含有紫外线，在载物台前上方放一块棕色遮光板，以防紫外线损伤视网膜。

　　(6)电压不稳会降低高压汞灯的使用寿命，光源电源加配稳压器。

　　(7)为延长汞灯寿命，在开启后15min方可关闭；汞灯荧光电源一旦关闭，再次启动至少需等待10min，以使水银蒸汽冷却复至原态，否则会影响灯的寿命。

　　olympus荧光显微镜的像观察：

　　(1)在开启荧光灯源后约5～10min激发光强度趋于稳定，装载样品进行观察；为防止在调焦和寻找物像过程中过度激发光照会造成样品荧光淬灭，先通过缩小olympus荧光显微镜的孔径光阑或加ND滤光片将激发光调节到适度强度，有规律地移动样品台，待确定镜像后，在调节到荧光状态用于拍摄记录。

　　(2)镜像质量不佳的调整。排除样品制备因素外，可进行的必要调节措施是：

　　①排除成像光路中的遮光或限光器件，如DIC附件、ND滤光片等。

　　②重新调节olympus荧光显微镜的收光器对焦和孔径光阑大小。

　　③细心调节olympus荧光显微镜物镜覆盖差校正环。