poly（A）+RNA的制备实验

RNA

NaOH 寡聚脱氧胸苷纤维素 poly（A）样品缓冲液 LiCl EDTA TE 乙酸钠

离心机 分光光度计 摇床

1.  先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱，然后用水冲洗。

2.  取0.5 g oligo（dT）纤维素干粉加1 ml 0.1 mol/l NaOH中，倒入柱内，以约10 ml 水冲洗。

3.  用10~20 ml 加样缓冲液平衡柱子，至流出液pH约7.5。

4  于70℃加热含2 mg 总RNA的水溶液10 min，再用10 mol/l LiCl调节溶液中LiCl至终浓度0.5 mol/l。

5.  加RNA溶液至oligo（dT）柱，并以1 ml poly（A）加样缓冲液洗涤，将流出液重新上柱2次以上。

6.  用2 ml 中度洗脱缓冲液洗柱子，用盛有2 ml 2 mmol/l DETA/0.1%SDS的试管收集洗脱的RNA溶液。

7.  按步骤2重新平衡柱子，重复步骤2~4的poly（A）选择吸附和冼脱过程。

8.  调整收集的RNA溶液的乙酸钠浓度至0.3 mol/l，加2.5倍体积乙醇，移至2个硅化的离心管中，-20℃放置过夜或干冰/乙醇中30 min。

9.  于4℃ 304 000 g 离心如沉淀RNA。弃去乙醇，晾干沉淀，重溶于150 ul 无RNA酶的TE缓冲液，合并样品。

10.  取5 ul 在70℃加热5 min 后，在1%琼脂糖凝胶电泳中检查RNA的质量。

来源于《cDNA微阵列技术中内标 Poly (A )+ RNA 的制备》