湿转的话，60KDa的蛋白转膜60分钟~90分钟一般就足够了转膜完成后可以将SDS-PAGE胶片去做一下考染，看看是否有未完全转膜的条带。如果有的话，可以下次适当延长专膜时间。
VDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时，多加或不加甲醇也是......
