wb蛋白分子量60左右转膜多久
湿转的话，60KDa的蛋白转膜60分钟~90分钟一般就足够了转膜完成后可以将SDS-PAGE胶片去做一下考染，看看是否有未完全转膜的条带。如果有的话，可以下次适当延长专膜时间。......阅读全文
电泳、转膜
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如RFLP分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。实验目的：掌握Southern blotting的原理及操作步骤。实验原理：1. 转膜的方式： 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向
Western转膜步骤
下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。I. 所需材料：•Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）•电泳后的迷你胶
电泳、转膜概述
转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。实验目的：掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤实验原理：1．转膜的方式：向上的毛细管转移向下的毛细管转移同时向两张膜
Southern转膜方法
Southern转膜方法（毛细管虹吸印迹法、电转移法与真空转移法）将凝胶中的DNA进行碱变性并将pH值恢复至中性后，即可将凝胶中的DNA片段转移到固相支持物上。用于转膜的固相支持物有多种，包括硝酸纤维素滤膜(NCM)、尼龙膜、化学活性膜和滤纸等，Southern转膜时可根据需要选择不同的固相支持物用
western转膜放置问题
1. 定义转膜时与胶接触的一面为“正”2. 封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反3. 假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触4. 假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式：10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白
小分子转膜时间
小分子的话就不要过夜转,采取100V一小时应该就可以了,注意降温。知识补充蛋白的分子量 是理论的分子量 其实还可能有一些修饰的 比如乙酰化 糖基化等那么要考虑分子量的问题 其次 你买的抗体怎么样？特异性 效价 亲和力等 是否适合做WB？ 再次 你可以用预染的蛋白marker试一试 确定你的目的蛋白没
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法：定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反，假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触，假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪：湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法：定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反，假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触，假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪：湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法：定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液，液体盖过膜就好，所以无所谓正反，假如用暗室显影法，将显影的试剂与“正”面接触，胶片与“正面”接触，假如用荧光的话，理论上“正”面朝下，扫描，但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪：湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
半干转是否要去膜？
半干转是否要去膜、滤纸、胶同样大小，因为胶大小不一定规则，膜和滤纸会大一点，那样会不会短路？可以相等，但是如果纸、膜比凝胶大就比较容易形成短路了，上下两层滤纸也不能因过大而相互接触，这样会短路，电流不会通过胶和滤纸。转移前和转移过程中看看电压就行，正常的半干转是慢慢变高的，最后结束时一般是开始的1.
western－blot转膜的原理
电场力作用条件下，带电粒子（PAGE胶中的蛋白）会发生定向迁移；蛋白大小如果超过膜孔径（0.22μm or 0.45μm），不会透过膜；WB用的膜具有蛋白吸附作用；
western转膜时间和电流
300mA90分钟,我们是1.0的胶厚度,要是0.75也行,但1.5mm的厚胶要时间长一些,另外你做的蛋白如果超过100kd建议时间更长一些,若是小蛋白就减少转模时间,立春红确定最适时间
转膜时甲醇的作用
转膜 将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如 NC 膜）上，通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所
Dry－Transfer－干法蛋白转膜
Trans-Bot SD Assembly1. Prepare the transfer buffer.2. Following electrophoresis, equilibrate the gels in transfer buffer. Equilibration facilitates
Western－转膜时用干转还是湿转效果比较好？
关键看效果怎么细分，干转，速度快，效率稍低，湿转，速度比较慢，转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主，干转就挺好的，效率非常高，几分钟就做完了。分子量特别大，又没有其他人的方案做参考，可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话，真是等到花儿也谢了。至于说效果，不是
做western转膜，用湿转电泳，还是半干转电泳好
半干转要用专门的半干转膜仪，而湿转用电泳仪配附件即可；半干转所需时间较短，但控制不好，中间发热比较大容易把膜和胶烘坏；而湿转耗时较长，尤其对大分子量的蛋白转膜效果较好。相对来讲，还是湿法转膜的实验室多一些。
Western－转膜时用干转还是湿转效果比较好
关键看效果怎么细分，干转，速度快，效率稍低，湿转，速度比较慢，转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主，干转就挺好的，效率非常高，几分钟就做完了。分子量特别大，又没有其他人的方案做参考，可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话，真是等到花儿也谢了。至于说效果，不是
western－blot－试验中蛋白转膜总转不上去
当然，首先要考虑的问题是你转过头了，蛋白质跑出去了。其次你的电流有点大，你也没说转了多久？用的干转还是湿转？是不是拿出来的时候很热？这种情况有可能使蛋白质降解。我们一般是湿转用100mA转2小时， 干转所需电流更小。
杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别
1. *纤维素膜*纤维素膜是蛋白印迹广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以
转膜实验原理与操作步骤
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定，是进行各种后续研究(如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理： 1. 转膜的方式： 向上的毛细管
RNA的电泳，转膜和杂交
实验原理：基本同 Southern Blotting，但因RNA 是单链分子，必须消除局部区域形成的二级结构，在电场中泳动的距离才能反映它本身的大小，因而需使用变性胶进行电泳；另应特别注意防止RNA 的降解。实验材料：经检测质量好的 RNA实验步骤：1．制胶：Agarose 1%-1.2% ， 1×
转膜后为什么要电泳
、转膜后的mark非常歪的原因是胶、膜以及滤纸（三明治组合）之间气泡没赶干净导致的。2、而条带特别不清晰就得看你的转膜时间了：转膜时间不够会导致胶上的蛋白包括mark没有完全转到膜上，转膜时间长了会导致胶上的蛋白包括mark已经穿过膜到滤纸上了。建议电泳后胶进行考马斯亮蓝染色、转膜后的膜进行丽春红染
westernblotting转膜是根据什么原理
western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。所以western blo
半干转膜仪如何使用
以WEALTEC的YRDIMES半干转膜仪为例，首先确认是转蛋白质还是核酸。蛋白质可参考Bjerrum and Schafer-Nielsen或Towbin或Dunn缓冲液系统配置缓冲液，电泳后将凝胶浸入缓冲液平衡5分钟，将转印膜和滤纸裁切并浸入缓冲液，合上上盖，按说明书垫上BP-C纸，普通转印1或
Western－不同转膜方法的取舍
转膜:小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。具体转膜条件需要多摸一下。30-80KD半干转恒流1mA/cm2，1-1.5h 都可以，大分子湿转100V，2.5h以上应该可以，转完膜丽春红染出的条带比较清楚的话，一般都能有结果。湿转，Buffer一定要预冷，最好提前一天配