颗粒污泥扫描电镜观察的样品预处理方法

 0.2M 磷酸缓冲液的配制：  磷酸二氢钠（NaH2PO4.2H2O）        2.94克 磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）       29克 纯水                             500mL pH调至7.4   2.5%戊二醛固定液的配制：  25% 戊二醛                   10mL  双蒸馏水                   40mL 0.2mol/L磷酸缓冲液              50mL  戊二醛最终浓度                2.5%  pH值7.3-7.4  

颗粒污泥扫描电镜观察的样品预处理方法如下：  （1）取样与清洗：在所需要的不同的反应阶段，从反应器中取出数颗好氧 颗粒污泥，放入5mL 的离心管中，用去离子水清洗数次，弃去上清液。 （2）固定：把清洗好的颗粒污泥加入2.5%，pH 为6.8 的戊二醛溶液并淹没 样品，并置于4℃冰箱中固定2-12 小时。  （3）冲洗：固定好的好氧颗粒污泥，用0.1mol/L，pH 值为6.8 的磷酸缓冲 溶液冲洗3 次，每次10min。  （4）脱水：采用梯度乙醇脱水，将冲洗好的样品依次置于系列浓度50%、  70%、80%、90%的乙醇进行脱水，每次10-15min，再用100%的乙醇脱水3 次， 每次10-15min。  （5）置换：用乙醇：乙酸异戊酯为1：1 的溶液，纯乙酸异戊酯各置换一次， 每次15min。  （6）干燥：将置换后的样品小心取出，放入滤纸叠成的小盒中，置入干燥 器中干燥8 小时。

（7）粘样与喷金：将干燥好的颗粒污泥样品，用镊子小心取出干燥好的样  品，用导电胶把颗粒样品粘附在铝制托盘上，之后用离子溅射镀膜仪（IB-5（Giko） 型）在样品表面镀上一层1500nm 厚度的金属膜。

  （8）观测：将处理好的待测样品置于扫描电镜（HITACHI S-4700 型）下观 察。