利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化 实验材料 T4 DNA 连接酶 感受态细胞 试剂、试剂盒 Taq 聚合酶 PCR 缓冲液 溴化乙锭（EB) 溶液 过硫酸铵（APS) 水溶液 仪器、耗材 琼脂糖凝胶 实验步骤 3.1 克隆NExT 混编过......阅读全文
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验
3.5 片段纯化经酶解和化学裂解得到的基因片段（见 10.3.3 ) 即可通过硅胶树脂直接从切割反应液中纯化（见 10.3. 5.1)，也可通过制备型尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化（见 10.3.5.2) 。最初我们认为如想得到特定大小的片段必须通过凝胶电泳来纯化，以确保在重组装反应中没有较长片段甚
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利用 DNA 混编模仿自然进化过程是优化 DNA 和蛋白质性质的常用方法。这里我们介绍这类方法的一个新进展，即利用标准的聚合酶链反应（PCR)放大基因文库时与其他 4 种标准 dNTP—起掺入 dUTP 作为确定 DNA 碎裂位点的交换核苷酸。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特
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实验材料 T4 DNA 连接酶感受态细胞试剂、试剂盒 Taq 聚合酶PCR 缓冲液溴化乙锭（EB) 溶液过硫酸铵（APS) 水溶液仪器、耗材 琼脂糖凝胶实验步骤 3.1 克隆NExT 混编过程中，使用包含限制性酶切位点的混编引物的配对位点应设置在紧挨着目标基因的两侧，理想的退火温度为 60°C 左右
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3.6 纯化片段的定量为了分析和比较纯化得到的 DNA 的产量，我们首先使用 SYBR Greenn 试剂来定量。因为 NExT DNA 混编方法的重复率很髙，我们只定量一次即可（见注 16 )。通常我们都能获得浓度为 40~60 ng/μl 的 DNA 片段。( 1 ) 取 2 μl 纯化的 DN
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3.3 酶解反应和化学切割将尿苷酸交换 PCR 纯化后的产物进行 UDG 酶解反应，在交换核苷酸位置切割 DNA。该酶对双链和单链 DNA 均有效，通过对双脱氧尿苷 C1' 位点的亲核攻击引发水解反应，高特异的去除尿嘧啶基团 [12] 。哌啶用于经 UDG 酶切割去除尿嘧啶后的骨架部分
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化 实验材料 T4 DNA 连接酶 感受态细胞
鸟嘌呤核苷酸交换因子的定义
中文名称鸟嘌呤核苷酸交换因子英文名称guanine nucleotide-exchange factor;GEF定 义有助于小G蛋白上的鸟苷二磷酸（GDP）和鸟苷三磷酸（GTP）相互转换，从而活化Ras和Rho等小G蛋白的一类蛋白质家族。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞通信与信号转导（二级学科
鸟嘌呤核苷酸交换因子的定义
中文名称鸟嘌呤核苷酸交换因子英文名称guanine nucleotide-exchange factor;GEF定 义有助于小G蛋白上的鸟苷二磷酸（GDP）和鸟苷三磷酸（GTP）相互转换，从而活化Ras和Rho等小G蛋白的一类蛋白质家族。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞通信与信号转导（二级学科
Mol Cell：新型DNA剪切技术比传统CRISPR-CAS9更优越
近年来，一种名为CRISPR-Cas9的工具改变了基因研究，就像一把小剪刀一样，允许科学家在精确的位置剪断和编辑DNA链。 但有时候，完成这项工作需要的不仅仅是剪刀。现在，一个合作的国际团队推出了一种新的基于CRISPR的工具，它更像是一台粉碎机，能够清除人体细胞中的长链DNA。图片来源：Zh
什么是核碎裂？
核碎裂（karyorrhexis）：表现为染色质崩解成致密蓝染的碎屑，散在于胞浆中，核膜溶解。