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4种常用蛋白浓度测定方法的比较

蛋白浓度测定方法有很多种,各种蛋白质含量测定的研究也屡见报道。每种方法都有其优点和局限性,在蛋白质样品中往往会含有一些化学试剂,有些化学试剂会干 扰蛋白浓度测定。因此,寻找合适的实验方法以避免干扰对蛋白浓度测定的准确性至关重要。基于Lowry法在测定PEG_IL_6样品时出现大量黄绿色沉 淀,尿素对BCA法测定蛋白浓度测定有严重干扰,影响结果准确性,我们试验了外两种方法,并进一步对方法进行了比较分析。1 材料Folin酚试剂、考马斯亮蓝G_250及4,4-二羧酸-2,2-二喹啉(BCA)均为Sigma公司产品;总蛋白(BSA)标准购自上海生物制品研究 所;变性液为大肠杆菌破碎后加入β一巯基乙醇处理的样品;其它试剂均为国产分析纯。2 方 法Lowry法操作参考文献。磺基水杨酸沉淀法操作参考 文献。Bradford法操作参考文献,为方便试验稍作改变,即取0~500 gg/mL的样品100 L加Bradford试剂2 mL,室温放置5......阅读全文

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——检测

实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测,对于不同的目的,应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性,所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大

知识分享:蛋白质含量的测定方法

  实验原理:   蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法、双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bra

血药浓度测定方法的选择

一、 哪些药物在什么情况下需要监测血药浓度 处于有效范围虽然很重要,但并不是所有的药物在各种情况下都需要监测。有下列的情况进行监测是十分必要的: (一) 安全范围窄、毒副作用强的药物。 如地高辛的安全而有效的血清浓度范围为0.9-1.8ng/ml,由于本品制剂生物利用度的差异及病人个体的差异,服常

血药浓度测定方法的选择

一、 哪些药物在什么情况下需要监测血药浓度处于有效范围虽然很重要,但并不是所有的药物在各种情况下都需要监测。有下列的情况进行监测是十分必要的:(一) 安全范围窄、毒副作用强的药物。如地高辛的安全而有效的血清浓度范围为0.9-1.8ng/ml,由于本品制剂生物利用度的差异及病人个体的差异,服常用剂量时

血药浓度测定方法的选择

一、 哪些药物在什么情况下需要监测血药浓度处于有效范围虽然很重要,但并不是所有的药物在各种情况下都需要监测。有下列的情况进行监测是十分必要的:(一) 安全范围窄、毒副作用强的药物。如地高辛的安全而有效的血清浓度范围为0.9-1.8ng/ml,由于本品制剂生物利用度的差异及病人个体的差异,服常用剂量时

血药浓度测定方法的选择

一、 哪些药物在什么情况下需要监测血药浓度处于有效范围虽然很重要,但并不是所有的药物在各种情况下都需要监测。有下列的情况进行监测是十分必要的:(一) 安全范围窄、毒副作用强的药物。如地高辛的安全而有效的血清浓度范围为0.9-1.8ng/ml,由于本品制剂生物利用度的差异及病人个体的差异,服常用剂量时

浅谈食品中蛋白质测定方法的研究进展

蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。食物中的蛋白质是人体中氮的惟一来源, 具有糖类和脂肪不可替代的作用。蛋白质与营养代谢、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转和遗传等密切相关, 其分离与定性、定量分析是生物化学和其他生物学科、食品检验、临床检验、诊断疾病、生物药物分离提纯和质量检验中最重要的工

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

包涵体的纯化-2

1.2.7重组融合蛋白的纯化 PrP-pET-32a(+)转化表达菌E.coli BL21(DE3),TB培养基中,25℃,AMP 200 ug/ml,摇床(250 r/min)培养至OD600约为1.5,更换等体积新鲜TB培养基,加入IPTG至终浓度1 mM,AMP 200 ug/ml,

ELISA方法学:开发实践中不可不知的亲和力测定方法开发1

一、前言目前用于测定受体配体间的亲和力,也就是解离平衡常数的方法,主要有:热力学测定方法动力学测定方法饱和浓度法 其中动力学测定方法和饱和浓度法较为通用:动力学测定方法(如Biacore)涉及到比较昂贵的仪器投入,饱和浓度测定法为国内绝大多数生物药物企业常用的测定方法。ELISA用于亲和力的测定是饱

包涵体的纯化和复性总结-2

8、包涵体复性液配方 对于包涵体复性,一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始,到2M 左右时结束。对于盐酸胍而言,可以从4M开始,到1.5M 时复性过程已经结束。TRIS系统和PBS系统都没有明确的规定,这些需要你在实验过程中不断试验,确定合适的缓冲系统;不过复性过程主要

甲状腺检查全面解析

史上最全的甲状腺疾病实验室检查项目,您值得收藏!血清甲状腺激素测定甲状腺素(T4)全部由甲状腺分泌,而三碘甲腺原氨酸(T3)仅有20%直接来自甲状腺,其余约80%在外周组织中由T4经脱碘代谢转化而来。T3是甲状腺激素在组织实现生物作用的活性形式。正常情况下,循环中T4约99.98%与特异的血浆蛋白相

血清胱抑素C及临床应用

血清胱抑素C及其临床应用: 胱抑素C(CystatinC,简称CysC)亦称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,是一种由120个氨基酸组成,分子量为13kDa的低分子量、碱性非糖化蛋白质。CysC基因在包括肾、肝、胰、肠、胃、肺及胎盘等所有组织中持续地转录和表达。研究发现CysC是半胱氨酸蛋白酶抑制物家族的成

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史上最全面解读甲状腺疾病的实验室诊断

一、血清甲状腺激素测定(TT4、TT3、FT4、FT3)甲状腺素(T4)全部由甲状腺分泌,而三碘甲腺原氨酸(T3)仅有20%直接来自甲状腺,其余约80%在外周组织中由T4经脱碘代谢转化而来。T3是甲状腺激素在组织实现生物作用的活性形式。正常情况下,循环中T4约99.98%与特异的血浆蛋白相结合,包括

ELISA技术综述

  ELISA原理   ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELI

免疫印迹western实验中内参蛋白的选择和注意事项

  免疫印迹western实验中内参基因的选择和注意事项   Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。   虽然,顺利的时候Western blot做

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蛋白质含量的测定方法(一)

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Western实验中内参基因的选择及使用方法

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包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性

蛋白的复性是一个世界性的难题,没有通用的方法,甚至没有靠得住的规律,只能试。可以参考以下文章。该文出处已经忘了,如果有人知道原创作者或网上出处,请补充。包涵体表达的蛋白的复性包涵体表达的蛋白的复性包涵体:包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集,形成无活性的固体颗粒。包涵体的组成与特性:一般含有50%以

原位微量BCA蛋白定量法

简述:传统标准的BCA蛋白定量分析方法常规均使用试管或者微孔板进行检测,通过对传统方法进行改进,可使用BioTek公司的Take3TM 超微量多体积检测板进行原位微量BCA法蛋白定量分析。待测蛋白样品和BCA工作缓冲液按照顺序直接加在Take3TM板的微量定量孔处、温浴,使用EpochTM

蛋白纯化经验指南-1

蛋白纯化经验指南生物谷整理 http://www.bioon.com  原创:Chromatography weixingui@263.net, 推荐书籍:《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》 1) 我现在手头

临床蛋白电泳及进展/基本知识/概述

分散介质中的带电粒子在直流电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳(electrophoresis)。蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动,这就是蛋白质的电泳现象。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界面电泳技术,并成功地将血清

影响凯氏定氮法测定粗蛋白准确性应注意的问题

随着饲料行业的飞速发展,饲料原料及其饲料产品的价格也居高不下。而粗蛋白的检测是评定饲料原料及其产品的重要指标之一,目前常用的为凯氏定氮法,即国家颁布的《饲料中粗蛋白的测定方 法》(GB1996-6432)。但是该方法也存在着测定过程较复杂、费时等缺陷,测定时除严格按照规定程序操作外,还需要一定的实验

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【盘点】定量蛋白组学将在未来10年飞速发展

  人类基因组计划的成功实施,我们已初步掌握了自身的遗传信息。但阐明人类基因组整体功能的功能基因组学仍任重而道远。蛋白质作为生命活动的"执行者",自然成为生命科学研究的新"宠儿"。几乎在所有生命科学领域内,科学研究工作者都需要对细胞、组织或完整生物体的蛋白进行定性描述或定量检测。对一种细胞、组织或完

用色谱分析法建立兽药残留分析方法的基本步骤

近20年来,兽药(包括药物添加剂)在畜牧业中的应用日益广泛,但是兽药的使用无疑会导致动物体内药物的滞留或蓄积,并以残留的方式进入人体及生态系统。兽药残留对人类及环境的危害主要是慢性、远期和累积性的,如致癌、发育毒性、体内蓄积、免疫抑制、致敏和诱导耐药菌株等。动物性食品中的兽药残留已成为公认的农业和环

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类