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结晶紫法活性测定1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶（以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培养基（10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2）吹打细胞，使形成细胞悬液。进行细胞计数，使细胞数为2~2.5x105个/ml。接种于96孔细胞培养板，100µl/孔。接种细胞时须不断摇动细胞悬液，以保证各孔细胞数的均匀一致。96孔板放置于37℃、5%CO2培养箱中培养22h，观察到孔中细胞长满70~80%。2、在上述RPMI-1640完全培养基中加入放线菌素D，使终浓度为1.5µg/ml，配成样品稀释液。取此稀释液900µl至Eppendorf管中，另在9个5ml管中加入700µl稀释液。3、用完全培养基将基因工程人肿瘤凋亡素样品（上海恰尔生物技术有限公司研制，批号：03......阅读全文
实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测，对于不同的目的，应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性，所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大
（二）乳过氧化物酶法（LPO） 本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。 1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。 2．方法
1.2.7重组融合蛋白的纯化 PrP-pET-32a（+）转化表达菌E.coli BL21（DE3），TB培养基中，25℃，AMP 200 ug/ml，摇床（250 r／min）培养至OD600约为1.5，更换等体积新鲜TB培养基，加入IPTG至终浓度1 mM，AMP 200 ug/ml，
一、前言 《中国药典》2020 年版的编制，正值“国家经济和社会发展 十三五规划”实施期间，是我国健康中国建设和实现全面建成小 康社会目标的关键时期，也是我国建立创新型国家、由制药大国 向制药强国迈进的重要阶段。实施药品标准提高行动，编制好新 版《中国药典》，对于保障公众用药安全有效，推进
一、前言 《中国药典》2020 年版的编制，正值“国家经济和社会发展 十三五规划”实施期间，是我国健康中国建设和实现全面建成小 康社会目标的关键时期，也是我国建立创新型国家、由制药大国 向制药强国迈进的重要阶段。实施药品标准提高行动，编制好新 版《中国药典》，对于保障公众用药安全有效，推进医药
8、包涵体复性液配方 对于包涵体复性，一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始，到2M 左右时结束。对于盐酸胍而言，可以从4M开始，到1.5M 时复性过程已经结束。TRIS系统和PBS系统都没有明确的规定，这些需要你在实验过程中不断试验，确定合适的缓冲系统；不过复性过程主要
关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌？ 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎
什么是浓度分析？ 一般在浓度分析中，需加入不同浓度的目标分析物做测定，并根据测量的结果对每个样本的浓度创建一个标准曲线。随着分析物浓度的增加，与固定的结合配偶体的结合速率也增加。然后通过标准曲线确定未知的样品中分析物的浓度。 为什么我们要测量蛋白浓度？ 蛋白对研究很重要，因为它们构成了植
生物药物包括直接从生物体分离纯化所得生化药物及利用基因重组技术或其它生物技术研制的生物技术药物及生物制品。由于生物药物具有毒性低、副作用小、易被吸收的特点，同时具有多方面的生物活性及功能，在疾病的预防、诊断及治疗方面有着突出贡献。随着人们对生命本质及身体健康的日益关注，生物药物的研究和开发日趋增
9、什么叫复性成功 复性效果的检测： 根据具体的蛋白性质和需要，可以从生化、免疫、物理性质等方面对蛋白质的复性效率进行检测。 1，凝胶电泳：一般可以用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳可以检测变性和天然状态的蛋白质，或用非还原的聚丙烯酰胺电泳检测有二硫键的蛋白复性后二硫键的配对
史上最全的甲状腺疾病实验室检查项目，您值得收藏！血清甲状腺激素测定甲状腺素（T4）全部由甲状腺分泌，而三碘甲腺原氨酸（T3）仅有20%直接来自甲状腺，其余约80%在外周组织中由T4经脱碘代谢转化而来。T3是甲状腺激素在组织实现生物作用的活性形式。正常情况下，循环中T4约99.98%与特异的血浆蛋白相
一、实验目的酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶
一、血清甲状腺激素测定（TT4、TT3、FT4、FT3）甲状腺素（T4）全部由甲状腺分泌，而三碘甲腺原氨酸（T3）仅有20%直接来自甲状腺，其余约80%在外周组织中由T4经脱碘代谢转化而来。T3是甲状腺激素在组织实现生物作用的活性形式。正常情况下，循环中T4约99.98%与特异的血浆蛋白相结合，包括
一、 哪些药物在什么情况下需要监测血药浓度 处于有效范围虽然很重要，但并不是所有的药物在各种情况下都需要监测。有下列的情况进行监测是十分必要的： (一) 安全范围窄、毒副作用强的药物。 如地高辛的安全而有效的血清浓度范围为0.9-1.8ng/ml，由于本品制剂生物利用度的差异及病人个体的差异，服常
结晶紫法活性测定1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶（以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培养基（10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2）吹打细胞，使形成细胞悬液。进行细胞计数，使细胞数为2~2.5×105个
实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌
药物在血浆中会不同程度地与血浆蛋白结合，其结合的程度能够影响药物的体内的吸收、分布、代谢和排泄，进而会影响药物的药效学行为。一般来说，药物在吸收进入血液之后，仅游离的药物能够到达作用部位，产生药理学活性。平衡透析法是基于药物结合的平衡原理来测定药物游离浓度最常用的方法，也是研究药物血浆蛋白结合率的经
原理 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。 为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的
药物在血浆中会不同程度地与血浆蛋白结合，其结合的程度能够影响药物的体内的吸收、分布、代谢和排泄，进而会影响药物的药效学行为。一般来说，药物在吸收进入血液之后，仅游离的药物能够到达作用部位，产生药理学活性。平衡透析法是基于药物结合的平衡原理来测定药物游离浓度最常用的方法，也是研究药物血浆蛋白结合率的经
一、酶促反应1913年，Michaelis和Menten根据Henri等提出的酶-底物复合物学说，用简单的快速平衡或准平衡概念推导了单底物的酶促反应方程，即米-曼氏方程（Michaelis-Menten equation）。酶促反应可表示为：
实验材料 宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体包装提取物电转化感受态大肠杆菌试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶缓冲液限制性内切核酸酶通过 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文库含适当抗生素的 Terrific 球脂平板含适当抗生素的 Terrific 肉汤培养基仪器、耗材 cDNA 合成试剂盒实验步骤
类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段：1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库；2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体
ELISA原理 ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性，对标本进行检测；由于结合与固体承载物（一般为塑胶孔盘）上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计 其结合 机制後，配合酵素显色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同，ELI
实验方法原理在 SDS 电泳中，由于 SDS 和还原试剂使蛋白质变性而失去生物活性，所以电泳后的检测方法不如常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳多，一般为考马斯亮蓝染色和银染色，其次为荧光方法和转移后检测。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液磷酸缓冲液贮液咪唑缓冲液贮液过硫酸铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮
一、 哪些药物在什么情况下需要监测血药浓度处于有效范围虽然很重要，但并不是所有的药物在各种情况下都需要监测。有下列的情况进行监测是十分必要的：(一) 安全范围窄、毒副作用强的药物。如地高辛的安全而有效的血清浓度范围为0.9-1.8ng/ml，由于本品制剂生物利用度的差异及病人个体的差异，服常用剂量时
一、 哪些药物在什么情况下需要监测血药浓度处于有效范围虽然很重要，但并不是所有的药物在各种情况下都需要监测。有下列的情况进行监测是十分必要的：(一) 安全范围窄、毒副作用强的药物。如地高辛的安全而有效的血清浓度范围为0.9-1.8ng/ml，由于本品制剂生物利用度的差异及病人个体的差异，服常用剂量时
Nature Methods - 5, 741 - 747 (2008) 作者：Nathan Blow 分析测试百科 译 近年来，质谱仪大幅提高了动态范围和灵敏度，使研究者们在疾病生物标志物的发现和验
包涵体表达的蛋白的复性摘要 综述了包涵体形成、包涵体分离和溶解、包涵体折叠复性的方法、复性产率低下的主要因素以及通过分子伴侣、低分子量添加物等的应用而提高了蛋白质复性产率。关键词 包涵体 蛋白质 复性Abstra
实验材料链霉亲和素-过氧化物酶 &
实验步骤在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。