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染色质免疫沉淀技术的应用

随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域,要想提供蛋白因子直接调控的证据,需要直接检测蛋白质-DNA的相互作用,而染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一种研究体内蛋白质与DNA相互作用的理想技术。 随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域。研究某个蛋白因子的调控功能,可以通过对蛋白活性、蛋白数量以及蛋白功能的控制,影响下游基因的表达,而下游基因的变化又可以通过基因芯片、抑制消减杂交、差异显示RT-PCR等方法进行研究。但这些方法都无法提供证据证明这些变化是受某个蛋白因子直接调节的,还是间接的由其他变化引起的,所以就要直接检测蛋白质-DNA的相互作用。传统的方法包括转录因子结合实验,电泳迁移率变动分析,DNas......阅读全文

染色质免疫沉淀(ChIP)技术的难点及应用-2

3. 染色质免疫沉淀Input对照:在进行免疫沉淀前,需要取一部分断裂后的染色质做Input对照。Input是断裂后的基因组DNA,需要与沉淀后的样品DNA一起经过逆转交联,DNA 纯化,以及最后的PCR或其他方法检测。Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果,还可以根据Input中的靶序

体内甲醛交联及染色质免疫沉淀--研究DNA和蛋白质作用

染色质由真核基因组包装而成,它参与了转录、复制、重组、修复等许多以DNA一蛋白质相互作用为基础的生化过程。研究者感兴趣的是这些过程涉及到哪些特异的基因或DNA序列,有哪些蛋白质参与。尽管有许多人对染色质进行分类,就像Holde将其分为转录活性或非活性位点,但染色质构本身是动态的,并且DNA与非组蛋白

染色质免疫共沉淀研究

真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比,染色质免疫沉淀技术(ChIP)能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白,是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。染色质免疫沉淀技术(chro

染色质免疫沉淀(ChIP)技术的难点及应用-1

序言随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学的研究逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域。研究某个蛋白因子的调控功能,可以通过对蛋白活性(激活或抑制其活性),蛋白数量(过表达Overexpression或基因缺陷型Knockout), 以及蛋白功能(功能缺陷

Cell特辑:免疫沉淀

  “Cell Press Selections”是由Cell出版社推出的一份推荐文章集合手册,主要介绍某个生命科学研究领域最新的进展及突出成果。相关特辑内容包括研究论文,评论性文章以及snapshots,涉及了同一领域的方方面面,更为重要的是这些文章由赞助商赞助,可以免费获取。  蛋白与DNA之间

快速了解染色质免疫共沉淀技术(ChIP)

  ChIP技术的原理   在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段,再通过多种下游检测技术(定量PCR、基因芯片、测序等)来检测此富集片

快速了解染色质免疫共沉淀技术(ChIP)

ChIP技术的原理在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段,再通过多种下游检测技术(定量PCR、基因芯片、测序等)来检测此富集片段的DNA序

广西大学最新文章:改进染色质免疫共沉淀方法

  作为研究基因表达调控的重要方法,近年来染色质免疫共沉淀得到了越来越广泛的应用,但有关将乳腺组织作为ChIP材料的研究及其方法尚未见报道。  近期来自广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室等处的研究人员提出了一种新型乳腺组织染色质免疫共沉淀方法,这种方法获得的DNA样品中, 靶序列得到

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

染色质提取试剂盒的原理

染色质(Chromatin)最早是1879年Flemming提出的用以描述核中染色后强烈着色的物质。现在认为染色质是细胞间期细胞核内能被碱性染料染色的物质。染色质的基本化学成分为脱氧核糖核酸核蛋白,它是由DNA、组蛋白、非组蛋白和少量RNA组成的复合物。染色质是真核生物基因组DNA存在的主要形式。因

ChIP-Chip技术的介绍与应用

人类基因组计划的完成开启了一个新的纪元——功能基因组时代来临,与基因信息相比较,人们更关注于基因的功能、调控网络与信号通路等信息。表观遗传学研究与核内蛋白因子的功能分析成为基因表达调控研究的重要组成部分。结合了染色质免疫共沉淀与基因芯片技术的ChIP-chip技术的浮现使得全基因组范围内DNA与蛋白

基因组的三维结构

  摘要: 阐明染色质复杂结构的技术有染色质构象捕获(chromatin conformation capture, 3C)及更高通量的衍生技术4C、5C,这些提供了长距离的染色质相互作用,但不能扩展到整个染色质相互反应组。在2009年末,两种新方法的迸发,有望绘出全基因组范围的相互作用图谱。  

免疫组化实验原理和步骤

  实验原理:   抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原

最新!北京大学何爱彬研究组Molecular Cell发文

  2019年8月27日,北京大学分子医学研究所,北京大学-清华大学生命科学联合中心研究员何爱彬研究组在Molecular Cell杂志在线发表题为“CoBATCH for high-throughput single-cell epigenomic profiling”的文章,报道了一种新的具有普

研究观测到染色质重塑中DNA的B-Z构象转变

  近年来,Z型DNA(Z-DNA)的研究引发关注,但是在细胞中对其进行观测还存在困难,主要原因是缺少一种简便可靠的手段对其进行直接观测。最近,中国科学院合肥物质科学研究院智能机械研究所研究员黄青课题组与郑州大学张凤秋课题组合作,利用红外光谱技术观测并研究染色质重塑中DNA的B-Z构象转变,相关研究

徐国泰博士等揭示ER阳性乳腺癌耐药的表观遗传学机制 ​

  据最新发表于CA Cancer J Clin杂志的全球癌症数据统计,全球每年乳腺癌新发病例约210万,死亡病例62.7万,在所有导致死亡的癌症类型中排名第二【1】。乳腺癌细胞可以依据其表达雌激素受体(Estrogen receptor, ER)、孕激素受体 (Progesterone recep

染色质免疫沉淀法(Chromatin immunoprecitation,ChIP)

染色质免疫沉淀法(Chromatin immunoprecitation,ChIP)是研究体内DNA与蛋白质相互作用的重要工具。它可以灵敏地检测目标蛋白与特异DNA片段的结合情况,还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系。核小体组蛋白可以发生多种翻译后的共价修饰,如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等,这些

组织标本的处理

 取 材 取材是制作切片程序中的首要步骤,取材不当,将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要,不能随意的切取组织来制作组织切片,否则病理检验的结果是不会令人满意的。一、取材工具:取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦,不应使用有钩镊子或血管钳等手术

植物染色质免疫沉淀试剂盒(CHIP)的使用说明

蛋白质和DNA的相互作用是调控细胞反应过程的要素之一。染色质免疫沉淀分析方法(chromatin immunoprecipitation, CHIP)是研究活体内DNA和蛋白质的相互作用的最新最有力的研究工具。CHIP技术通过三大步骤实现:第一,甲醛固定后染色质分离和断片;第二,运用特异蛋白

Cell综述探讨表观遗传检测:一张图解析四种方法

  11月17日Cell杂志SnapShot专栏介绍了表观遗传研究的检测方法,这四种方法包括:亚硫酸氢钠测序法  (bisulfite sequencing)、染色质免疫沉淀测序技术(chromatin immunoprecipiation sequencing)、开放染色质测定(determina

下一代测序技术与微阵列技术:谁更适合生物医学研究?

  随着技术进步和测序成本的大幅下滑,下一代测序(NGS)如雨后春笋般普及开来,研究人员在开展大规模基因组应用研究中倾向于选择NGS技术而非微阵列技术,这得益于可接受的测序成本以及越来越简单的、普及的测序方法。   NGS 系统和配套应用的不断成熟,诸如文库制备

染色质免疫共沉淀(ChIP)

染色质免疫共沉淀实验方法原理在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A”特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prore

染色质免疫共沉淀(CHIP)的原理是怎样的?

  真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在。因此,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。   染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP )是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。   染

高通量测序技术的原理及各平台优势和实践应用的分析

  随着人类基因组计划(human genome project )在2003年顺利完成,基因组测序技术取得了长足的进步,这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊,这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以

高通量测序技术的原理及各平台优势和实践应用的分析

  随着人类基因组计划(human genome project )在2003年顺利完成,基因组测序技术取得了长足的进步,这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊,这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以

清华大学颉伟课题组12月接连发表Molecular Cell、PLOS Genet

  生物通报道:来自清华大学生命科学学院的颉伟研究员,早年毕业于北京大学,2008年获美国加州大学洛杉矶分校博士学位,曾在加州大学洛杉矶分校、圣地亚哥Ludwig肿瘤研究所和加州大学圣地亚哥分校从事博士后研究,2013年起任清华大学生命科学学院研究员,主要科研领域与方向包括表观遗传学、基因组学和生物

免疫电镜胶体金标记法操作大全

金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原 反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫

染色质免疫共沉淀(ChIP)

实验方法原理 在保持组蛋白和DNA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A”特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein

ChIP实验技术经验分享

   染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究活体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。随着对基因功能研究的不断深入,这项技术正越来越多的被应用于科研的各个领域。

免疫资料——免疫学常用简称介绍

  1:抗体查询常用名词   Reactivity (物种与抗体反应):Species with which the antibody reacts   Host Species (宿主):Host in which the antibody was generated   Applicati