一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白（二）
500 ng Hela 细胞裂解液用相同的色谱柱，相同的色谱梯度，将 QE HF 切换至 DIA 扫描模式进行 3 次 DIA 数据采集。在一次扫描循环中，目标母离子质核比范围 400–1000，四极杆的隔离窗口为 12 Da，包含 50 次 MS/MS 扫描。每一张 MS/MS 谱图中包含了 12 Da 窗口内的所有母离子的碎片离子信息。QE HF 使用了超高场的 Orbitrap，扫描速度是 20 Hz，所以每次循环所用的时间约为 2.4–3 s，与色谱兼容（图 2）。Skyline 处理 DIA 数据时从谱图库中选取强度最高的多个碎片离子进行色谱峰抽提。Skyline 中嵌入的 mProphet 软件会根据同一肽段的多个子离子峰的 feature 进行打分。Feature 包括子离子共流出峰形、保留时间偏差、dotp 值、信噪比等。为了区分假阳性的子离子峰，mProphet 可以建立 decoy......阅读全文
一小时 DDA 鉴定 DIA 定量 4000 个 Hela 蛋白（二）
500 ng Hela 细胞裂解液用相同的色谱柱，相同的色谱梯度，将 QE HF 切换至 DIA 扫描模式进行 3 次 DIA 数据采集。在一次扫描循环中，目标母离子质核比范围 400–1000，四极杆的隔离窗口为 12 Da，包含 50 次 MS/MS 扫描。每一张 MS/MS 谱图中
一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白（二）
Skyline 中嵌入的 mProphet 软件会根据同一肽段的多个子离子峰的 feature 进行打分。 Feature 包括子离子共流出峰形、保留时间偏差、 dotp 值、信噪比等。为了区分假阳性的子离子峰， mProphet 可以建立 decoy 库，也可以将打分排名第二的肽段作为decoy，
一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白（一）
引言数据非依赖性的扫描模式（data-independent acquisition, DIA）是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。它的理念是用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量。 DIA 扫描模式中，超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并
一小时 DDA 鉴定 DIA 定量 4000 个 Hela 蛋白（一）
引言数据非依赖性的扫描模式（data-independent acquisition, DIA）是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。它的理念是用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量。DIA 扫描模式中，超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子，并快
Orbitrap Exploris™ 480在鉴定测试方面助力文献研究
今天跟大家分享的是Orbitrap Exploris™ 480的第1篇文献，作者是来自丹麦哥本哈根大学的Jesper V. Olsen教授，文中对Exploris 480联合FAIMS Pro的性能进行了全面测试，包括DDA与DIA鉴定，灵敏度测试，组织样品测试，磷酸化样品测试，以及TMT与DIA定
创新数据非依赖性采集用于复杂基质目标蛋白质...（一）
创新数据非依赖性采集用于复杂基质目标蛋白质的定量分析摘要 数据非依赖性采集(DIA)是随着定量蛋白质组学而建立的质谱扫描技术。DIA 能够获得扫描范围内所有母离子及二级子离子信息,不会造成低丰度离子信息的丢失,同时突破了高分辨质谱二级定量的通量限制。本研究基于静电场轨道阱Q-qIT-OT 三
创新数据非依赖性采集用于复杂基质目标蛋白质...（三）
对10 条肽段的分析结果汇总(表1),结果表明,3 种DIA 方法在fg ~ pg 数量级肽段范围内均显示出良好的线性、重现性和灵敏度。3 种方法的最低定量限均达到amol 级,其中肽段GEEMEEMVQSAR在DIA 中最低定量限达14 amol,超越了常规SRM 和PRM 的定量水平。比
定量蛋白质组学质谱采集技术进展（三）
然而PRM 的分析通量不如SRM。PRM 能同时监测最多10 ~15 个母离子,而SRM 能同时监测上百个离子对,因为高分辨质谱的有效扫描速度通常只有10 ~15 Hz,远慢于SRM 的有效扫描速度。但是这一问题正逐步得到解决,多重累积(Multiplexing, MSX)技术的发展和使用有
技术推广 DIA+PRM技术，全蛋白筛选及目标蛋白验证一体化
随着质谱仪器的不断更新换代，蛋白组学的技术也不断的革新，从最早的2-D电泳技术到基于LC-MSMS的蛋白定性；从Labelfree 技术到标记定量iTRAQ/TMT技术以及时下备受推崇的DIA/SWATH技术、PRM/MRM技术，每一次的技术革新都使得蛋白组学研究更上一阶。 当下蛋白组学研究中
定量蛋白数>1000个！血液样本DIA技术“质”的提升
传统的蛋白质组技术，如iTRAQ、TMT或者label-free等，采用的是DDA（data-dependent acquisition，数据依赖采集）数据采集方式，其策略是对响应最高的部分母离子进行二级采集。而新一代的蛋白质组学技术DIA（Data Independent Acquisitio