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9.纯化——包涵体蛋白包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。高化学稳定性的Superose 12及Sepharose 6FF凝胶过滤介质很适合在变性条件下做纯化。变性纯化后的蛋白需要复性至蛋白的天然构象。Superdex 75、Q Sepharose FF和Phenyl Sepharose FF分别被发现有助包涵体蛋白的复性。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。10.包涵体蛋白固相复性近年许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。去除变性剂后，蛋白在介质上成功复性，再将复性好的蛋白洗脱下来。固相复性避免了一般复性过程中蛋白质聚体的形成，所以复性得率更高，而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一......阅读全文
实验方法原理 在核内，RNA 聚合酶 Ⅱ 的转录产物同大量不同类型的核前体 mRNA/mRNA 结合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonuc
实验方法原理 在核内，RNA 聚合酶 Ⅱ 的转录产物同大量不同类型的核前体 mRNA/mRNA 结合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 结合形成 hnRNP 复合物。实验材料 HeLa S3 细胞抗体试剂、试
Gene Link寡核苷酸适用于要求苛刻的应用和一致的结果。我们认为，重视时间并且没有因寡核苷酸质量而导致实验失败的空间的研究人员应考虑使用Gene Link。我们针对每种寡核苷酸的众多质量控制步骤可确保您放心。 Gene Link Oligo合成部门不是“寡头工厂”。在合成过程中以及在通
凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯
在核内，RNA 聚合酶 Ⅱ 的转录产物同大量不同类型的核前体 mRNA/mRNA 结合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 结合形成 hnRNP 复合物。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法
以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化 实验材料 T4 DNA 连接
生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。 1.测定------分子量、PI &nbs
经过前期对多糖的提取，去除蛋白质、色素、小分子等物质得到粗多糖，而这些粗多糖其实是由很多分子量、结构不同的多糖混合而成。为了得到纯的多糖即均一性多糖，仍需进一步对这些粗多糖进行分离纯化。 1、分步沉淀法 多糖的结构和分子量不同，其极性大小不同，在有机溶剂（如醇或酮）中的溶解度不同，根据这一原
3.3 酶解反应和化学切割将尿苷酸交换 PCR 纯化后的产物进行 UDG 酶解反应，在交换核苷酸位置切割 DNA。该酶对双链和单链 DNA 均有效，通过对双脱氧尿苷 C1' 位点的亲核攻击引发水解反应，高特异的去除尿嘧啶基团 [12] 。哌啶用于经 UDG 酶切割去除尿嘧啶后的骨架部分
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。常见问题如下：一、假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋
3.5 片段纯化经酶解和化学裂解得到的基因片段（见 10.3.3 ) 即可通过硅胶树脂直接从切割反应液中纯化（见 10.3. 5.1)，也可通过制备型尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化（见 10.3.5.2) 。最初我们认为如想得到特定大小的片段必须通过凝胶电泳来纯化，以确保在重组装反应中没有较长片段甚
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板： ①模板中含有杂
11.纯化------中草药有效成分 中药的化学成分极其复杂。传统中药多是煎熬后服用，有效成份多较为亲水，包括生物碱、黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸、多糖、肽和蛋白质。灵活及综合性地利用多种层析方法。如离子交换、分子筛、反相层析，更容易分离到单一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝胶同时
VI 凝胶层析法分离纯化蛋白质一、目的了解凝胶层析的基本原理，并学会用凝胶层析分离纯化蛋白质。二、原理凝胶层析也称凝胶过滤、凝胶过滤层析、分子排阻层析和分子筛层析。凝胶是具有一定孔径的网状结构物质，凝胶层析是一种分子筛效应，主要用于分离分子大小不同的生物大分子以及测定其相对分子质量。相对分子质量小的
1、克隆PCR产物的最优条件是什么？ 最佳插入片段：载体比需实验确定。1:1（插入片段:载体）常为最佳比，摩尔数比1:8或8:1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T
定义 聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）， 聚合酶链式反应具体内容点击： 聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异
1.AP1（激活蛋白1）：是一个转录调节因子，它结合的同源序列为5'-TGAGTCA-3'。当基因的启动子区域存在AP1的结合位点时，这些基因可以被诱导，比如用佛波酯可诱导蛋白激酶C（2,7）。在细胞中，AP1形成c-Jun或Jun相关蛋白的同聚双体，或者形成c-Jun或Jun相关蛋
ABI7500荧光定量PCR仪已经成为分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域广泛应用的一种实验室仪器。ABI7500荧光定量PCR仪在操作中常会遇到哪些问题呢？该如何来解决呢？ 01
PCR仪已经成为分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域广泛应用的一种实验室仪器。PCR仪在操作中常会遇到哪些问题呢?该如何解决呢? 1、PCR在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PC
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的条
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的
连接反应的策略 可以采用几种策略来进行外源ＤＮＡ片段和质粒载体的连接。对此，可依据外源ＤＮＡ片段未的性质，以及质粒载体与外源ＤＮＡ上限制酸切位点的性质来作出选择。（一）外源ＤＮＡ片段未的性质带有各种未的外源ＤＮＡ的克隆方法见下表：──────────────────────
实验方法原理实验材料噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶靶 DNA试剂、试剂盒氯仿EDTA乙醇酚氯仿乙酸钠TE仪器、耗材琼脂糖凝胶水浴箱实验步骤一、材料1. 缓冲液与溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L, pH 8.0)乙醇酚：氯仿（1:1，V/V)乙酸钠（3 mol/L, pH 5.2
实验方法原理 实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶 限制性内切核酸酶
通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点实验方法原理 实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶靶 DNA试剂、试剂盒 氯仿EDTA乙醇酚氯仿乙酸钠TE仪器、耗材 琼脂糖凝胶水浴箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液氯仿EDTA ( 0