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华东理工大学甲醇酵母合成生物学研究获新进展

华东理工大学教授张元兴团队蔡孟浩研究组,在甲醇酵母合成生物学方面的最新研究进展日前在线发表于《代谢工程》。 甲醇是当前化工产业的大宗副产物,廉价易得,且可通过甲烷氧化、二氧化碳还原实现可再生制备,作为一种潜在的优质碳源已引起广泛关注。 研究人员通过在甲基营养型酵母——毕赤酵母中,异源重构并优化降血脂药物洛伐他汀、降血脂药物辛伐他汀关键中间体莫纳可林J的生物合成途径,使得以廉价、可再生的甲醇成为底物生产大宗或高附加值药用化合物的酵母细胞工厂概念得以实现。同时,研究人员对不同代谢途径节点进行了代谢途径的模块化设计及分配组装,采用不同荧光标记装载不同模块的酵母细胞实现菌群精确测量,最终通过多细胞共培养策略在反应器上实现了洛伐他汀及莫纳可林J的高效生物合成。 专家认为,该研究极大拓展了毕赤酵母作为传统重组蛋白表达系统的应用范畴,构建了一个高效、稳定、低成本、少污染的绿色细胞工厂,为他汀类药物的异源生物合成提供了一种新思路、新方......阅读全文

真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体

原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统,由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷,人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来,基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行,在技术方法上得到了很大发展,时至今

甲醇酵母系统表达的影响因素-1

酵母菌是单细胞真核生物,具有生长快、易于遗传操作、能对外源蛋白进行翻译后加工和修饰、不产生有毒产物等特点,被认为是表达外源蛋白的合适宿主。几种工业酵母尤其是巴氏毕赤酵母(pichia pastoris, Pp),因具有旺盛的生长力以及其它一些独特的性质,已发展成为较成熟的蛋白生产的表达系统。

几种蛋白表达系统优缺点分析

蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系,通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表

几种蛋白表达系统优缺点分析

  蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系,通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。   1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性

酵母表达外源蛋白(foreign protein)(3)

12、蛋白降解分泌表达的目标蛋白比胞内蛋白确实容易被降解。可以尝试以下几种办法:1、尽可能降低培养液的pH值减少酶活,酵母生长pH值比较广,4~7都可以试一下;2、多试几种蛋白添加剂,充当酶解底物(比如酵母酸);3、摸索最适下罐(摇瓶也一样),宁可少表达点也别给降解光了。实在没办法,只好换菌株或做p

异养菌转化自养菌获突破,这种菌将以CO2作为唯一碳源

  巴斯德毕赤酵母广泛用于工业酶和药物的生产。像大多数生物技术生产宿主一样,巴斯德毕赤酵母是异养的,生长在有机原料上,这些原料在食品和动物饲料的生产中具有竞争性用途。如果将二氧化碳用作碳原料,生物技术制造业将变得更具可持续性,因为它不会消耗有机原料,并且会消耗大气中的二氧化碳。  2019年12月1

甲醇酵母系统表达的影响因素-2

2、表达框的染色体整合位点和方式虽然相对于自主复制载体来讲,整合性载体的转化率较低,但由于Pp没有天然质粒,所以设计表达载体偏向于染色体整合,通过同源重组,载体整合到细胞染色体中间。整合性载体具有表达框稳定和可控制整合位点等优越性,并且能够发生多位点整合而获得多拷贝。AOX1和组氨酸脱氢酶(hist

2017年中国科学十大进展在京发布

  该项活动旨在加强对我国重大基础研究进展的宣传,激励广大科技工作者的科学热情和奉献精神,促进公众更加理解、关心和支持科学,在全社会营造良好的科学氛围。该项活动已成为我国基础研究传播工作的一个品牌,在科技界产生了良好反响。  1、实现星地千公里级量子纠缠和密钥分发及隐形传态“墨子号”卫星实现千公里级

中科院发布2017年中国科学十大进展

  “中国科学十大进展”遴选活动由科技部高技术研究发展中心举办,截至2018年已举办13届。研究进展由《中国基础科学》《科技导报》《中国科学院院刊》《中国科学基金》和《科学通报》五家编辑部推荐,由两院院士、973计划顾问组和咨询组专家、973计划项目首席科学家、国家重点实验室主任等专家学者经过初选和

科学大咖带你看懂2017年度中国科学十大进展

  科技部2月27日在北京公布了“2017年度中国科学十大进展”:实现星地千公里级量子纠缠和密钥分发及隐形传态;将病毒直接转化为活疫苗及治疗性药物;首次探测到双粲重子;实验发现三重简并费米子;实现氢气的低温制备和存储;研发出基于共格纳米析出强化的新一代超高强钢;利用量子相变确定性制备出多粒子纠缠态;

国家基金委发文:131项优选10项,每项约200万元!

  关于2020年度国家自然科学基金委员会与巴基斯坦科学基金会合作研究项目初审结果的补充通知  2020年度,国家自然科学基金委员会(NSFC)与巴基斯坦科学基金会(PSF)继续共同资助合作研究项目,经过公开征集,共收到项目申请149份。双方分别初审并核对后,已发布初审通知。现接到巴方信函勘误,最终

甲醇酵母基因表达系统

 1 甲醇酵母表达系统的特点  1.1 宿主  七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白(SCP),有很好的发酵基础,菌体密度可达100g/L干重。其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源,廉价而无毒。它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长,其中醇氧化酶AOX——甲醇代谢途径

微生物所在酵母中开发CRISPR-Cas9介导多重基因组编辑技术

  汉逊酵母(Ogataea polymorpha)是一种重要的工业微生物,常被用于研究甲醇利用、自噬、过氧化物酶体生物合成和硝酸盐同化等。除此之外,它有一个重要的特性,就是能够通过NHEJ将多达100个拷贝的靶基因整合到基因组上,这一特性可用于过表达外源基因合成多种产物。虽然CRISPR/Cas9

卢冠达博士开发按需生产药物的便携设备

  对于世界偏远地区或发展中国家的医生以及战场上的医务人员来说,要快速获取治疗患者所需要的药物,可能是具有挑战性的。  生物制剂药物被用于各种各样的治疗,包括糖尿病和癌症的疫苗与治疗,通常是在大型、集中的发酵工厂内生产的。这意味着,它们必须被运送到治疗地点,这可能是昂贵、耗时的,对于在供应链较差的地

酵母表达外源蛋白(foreign protein)(1)

1、 菌株用GS115表达不出蛋白,换KM71H后,大部分克隆能表达。2、温度: 在28度和室温下诱导表达,表达水平可能都不低。3、pH手册上用6.0,pH提高到6.8,不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA,最适pH大概 5-6左右。pH3的时候

羧肽酶的分离纯化方法

实验概要本实验以面包酵母为初始材料,制备了高纯度羧肽酶Y,并对羧肽酶Y的生化性质进行了检测。实验原理羧肽酶Y(Carboxypeptidase   Y)是由面包酵母中分离得到的一种蛋白水解酶,它对肽和蛋白质羧基末端的各种氨基酸(包括脯氨酸)具有广泛的水解能力,因此该酶已成为C末端分析中常用

G418

G418通过干扰核糖体的功能而阻断细胞的蛋白合成G418          G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,这种氨基糖类抗生素的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn6

1000篇气相色谱应用文献汇总(八)

701 SCTB9606 0 油脂选择性氢化催化剂的研制及氢化工艺条件的研究 702 SCTB9606 0 盐蒿精油化学成分和杀虫活性初探 703 SCTB9606 0 芝麻油、花生油中葵花

气质联用法同时测定肉制品中的抗氧化剂和防腐剂

  在食品中加入防腐剂可以延长保存期,防止腐烂变质,而食物中的油脂极易氧化发生酸败,并产生有毒物质,加入抗氧化剂可以预防这一过程的发生。山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸和对羟基苯甲酸酯类物质是国家批准可以在食品中限量添加的防腐剂[1],应用广泛,其对细菌、真菌、霉菌、酵母等有不同程度的抑制作用。丁基茴香醚(

白酒专用气相色谱仪分析白酒中的化学成分

白酒专用气相色谱仪分析该方法采用大口径毛细管柱(白酒专用柱),氢火焰离子化检测器检测。测定组分:C2~C6 脂肪酸多种组分特点:和填充柱相比,具有较高的分离能力、较快的分离速度和较好的惰性;与小口径毛细管相比,其柱容量较大,对进样技术要求不苛求,可避免了分流造成的歧视效应。分析时间短约为18min.

一文看懂白酒的化学成分

  酒是多种化学成分的混合物,水和酒精是其主要成分,除此之外,还有各种有机物。这些有机物包括:高级醇、甲醇、多元醇、醛类、羧酸、酯类、酸类等。这些决定酒的质量的成分往往含量很低,约占1%~2%,但种类很多,同时其含量的配比非常重要,对白酒的质量与风味却有着极大的影响。  酒精  酒精的学名是乙醇,乙

食品微生物快速检测技术研究

食物病原微生物是食品安全的重要内容,而对其的快速检测(验)一直是相关研究的热点。近年来,微生物的快速检测和自动化研究进展迅速。依靠培养基进行培养、分离及生化鉴定的传统方法费时费力。快速检测及其自动化则综合引用微生物学、化学、分子生物学、生物物理学、免疫学以及血清学试验技术对微生物进行分离、检测、鉴定

高效液相色谱法测定B1维生素的含量

  维生素B也称作维他命B,是B族维生素的总称,它们常常来自于相同的食物来源,如酵母等。维生素B是身体内新陈代谢必需的一环,每种维生素B都参与了关键的代谢反应,通常以辅酶的形式存在。   维生素B都是水溶性维生素,它们有协同作用,调节新陈代谢,维持皮肤和肌肉的健康,增进免疫系统和神经系统的功能,促进

聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用-2

第五节 PCR各处应用模式  一、兼并引物(Degenerate Primer)PCR  密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,

PCR各处应用模式

一、兼并引物(Degenerate Primer)PCR  密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽

PCR各处应用模式

一、兼并引物(Degenerate Primer)PCR  密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽

毕赤酵母表达(pichia pastoris expression )实验手册(5)

3.5 Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法3.5.1 模板的处理:1. 平板上的菌落长到肉眼可见时(约12小时);2. 将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好,并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物,或者或者一条使用载体上的引物,一条使用基因的特异性引物(这样做可以鉴定非

噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验

实验方法原理噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂TEN

微生物学检验基本技术(1)

第一节 微生物形态学检查   细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一,它是细菌分类和鉴定的基础,可根据其形态、结构和染色反应性等,为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查   由于细菌个体微小,肉眼不能看到,必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察,其内部的超微结构则需用电

微生物学检验基本技术(1)

随着现代医学及相关科学技术的发展,各学科相互交叉和渗透,医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平,许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术,准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物,并对引起感染的微生物进行耐药性监测,为临床对感