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蛋白浓缩(proteinconcentration)基本方法

蛋白浓缩方法基本有:丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法…… 1.丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白质变性。 2.免疫沉淀法:得有特异性抗体! 3.硫酸铵沉淀法:利用高浓度盐将蛋白质析出(盐析) 选择硫酸按是因为:盐析有效性,pH范围广,溶解度高,溶液散热少,经济! 4.(低温)有机溶剂沉淀法:强调低温(0-4度以下)是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性,可用乙醇,丙酮……注意:Mg2+离子,pH值 5.聚乙二醇沉淀法:使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解是散热低,形成沉淀的平衡时间短,通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀! 6.超滤法:主要针对小体积蛋白质溶液(几ml)此法更不易引起变性!不过得有浓缩器,不是哪个实验室都有的! 7.透析法:主要用......阅读全文

转谷氨酰胺酶及非肉蛋白对糜状肉制品质构性能的影响

摘要: 以猪肉为原料 , 根据中心复合旋转试验设计原理 , 采用响应曲面法研究转谷氨酰胺酶及非肉蛋白对肉制品质构性能的影响。0,1.5,5,8.5,10 g·kg 的转谷氨酰胺酶分别与 0,5,20,35,40 g·kg 大豆分离蛋白、酪蛋白、乳清浓缩蛋白、卵清蛋白组成 4 个试验组 ,

超滤离心管的常见问题有这些?

超滤离心管的常见问题与解答一:超滤离心管的膜材质是什么?密理博超滤离心管的膜材质为默克密理博特有的Ultracel再生纤维素膜,生产工艺严格,截留分子量明确而,蛋白吸附损失zui小。二:如果要用超滤离心管的方法分离两种蛋白,那么这两个蛋白的大小需要相差多少?按照经验,建议两个蛋白的分子量要相差一个数

蛋白分离的缓冲液系统比较

解离/非解离native缓冲液系统很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳(zone electrophoresis)的研究使用一种缓冲液系统,该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠(SDS),一种离子型去污剂,它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在包含有过量

超滤离心管使用方法是什么?

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子

超滤管使用方法和注意事项

离心管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,目前最常用的就是Millipore的。目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。 离心超滤管会

超滤管注意事项及使用方法有哪些?

离心管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,目前最常用的就是Millipore的。目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有

蛋白分离的缓冲液系统(Laemmli buffer system Laemmli)比较-2

堆积和pH值在SDS PAGE系统的相对的重要性 我们经常被问到,是否Novex®预制胶有浓缩胶,如果有,pH是多少。答案是肯定的,有浓缩胶(Novex®,Tris-glycine,和Trince胶),但是浓缩胶和分离胶之间的pH值相同。 pH值的变化依赖于胶的成分。请参看每一个产品以确定pH值

超滤离心管

超滤离心管 超滤离心管,备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用;两种回收浓缩液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存。这两种方法都可使浓缩液达到近乎完全回收;截留分子量广泛,配

超滤离心管使用注意事项

  (1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。  (2)新买来的超滤

超滤离心管原理是什么 有哪些注意事项

  超滤离心管,备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用。  使用注意事项  (1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为1

中空纤维膜过滤技术在病毒类疫苗中的应用(三)

3.中空纤维浓缩病毒培养液实例    相对于其他杂蛋白和DNA等杂质,病毒颗粒具有较大的分子量,因而可以使用超滤膜过滤和分子筛等技术按照分子量大小进行分离分级,建立通用的病毒纯化工艺。病毒类疫苗通常使用微载体细胞培养技术进行病毒培养,一定滴度的病毒培养收获液通过

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

超滤离心管怎么使用?

【求助】millipore超滤离心管想重复使用,请问如何清洗和保存? 最近使用超滤管,由于管子较贵,想重复用几次,但找不到可靠的资料。不知如何清洗和保存,比如有人说用叠氮化钠,有人说用氢氧化钠,有人说用乙醇浸泡。莫衷一是。很急用。 【回答精要】 使用后用0.1M NaOH泡24h,然后20%乙醇浸

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

恒天然毒奶粉召回工作困难 可口可乐:不知何时完成

  “7月31日,听到这个消息后,我决定立刻飞到中国来和大家分享一下我们的相关观点,我来到中国就充分意味着我们很重视中国市常 ”8月5日,因被曝出其生产的部分含肉毒杆菌的乳清蛋白流入中国,新西兰乳业公司恒天然集团首席执行官西奥·史毕根斯(TheoSpierings)携恒天然大中华区和印度区总裁魏

【恒天然承认奶源涉毒缘于管道】

  风口浪尖上的新西兰恒天然公司昨日针对其奶源涉毒事件在京举行新闻发布会。这家全球最大乳制品出口商的CEO西奥·史毕根斯在向中国及全世界消费者致歉之后,介绍了奶源“发现肉毒杆菌”过程,称其主因是管道清洁不彻底和缺乏检测。他同时承诺,“48小时之内,所有问题都会得到控制”。   史毕根斯在新闻发布会

华裔“总统奖”获得者PNAS:临床级质谱技术

  通过将两个行而有效的分析技术结合在一起,并加入一个来自血液的蛋白,就获得了了与临床上基于抗体检测同样精确和灵敏的新技术方法,研究人员在《美国国家科学院院刊》(PNAS)杂志在线版上发布了这项研究成果,这一技术能够加快发展以某些疾病特异性蛋白检测为基础的的诊断和治疗方法。   领导这项研究的是来

食品中蛋白质测量方法

  摘要:蛋白质是食品中的重要营养成分,也是评价食品营养价值的重要指标之一,因此蛋白质的测定在食品分析中是一个高频的分析项目,具有非凡的意义。目前测定蛋白质的主要方法有凯氏定氮法、分光光度法、燃烧法和近红外方法。本文主要采用了凯氏定氮法和燃烧定氮法两种方法测定:玉米淀粉,奶粉,蜂王浆,功能性大豆浓缩

Western Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)-9

MMM. 磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等? 解答:NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂,一般最好加。但是不加也可以,大部分时候是不用加的。我做的时候从未加过,都做出来了。 NNN. Western Blot中block的最短时间? 解答:每一步1小时足够了, 中间换抗体

新西兰“肉毒杆菌”乳品冲击波:“洋奶粉”遇尴尬

上图 8月4日,在新西兰首都惠灵顿的一家超市,货架上张贴“可瑞康”1段和金装版2段婴儿奶粉召回通知。   进口乳品再暴问题:2日,新西兰乳业巨头恒天然公司发布消息,称该公司一个工厂2012年5月生产的浓缩乳清蛋白粉检出肉毒杆菌,这些产品有中国进口商涉及。   4日,中国国家质检总局公布了4家进口

Western Blot详解-常见的问题指南(四)

9. 条件的摸索DDD. 用的是Santa Cruz的抗体,也实验过一抗和二抗肯定能结合,二抗加DAB肯定能显色。电泳的胶用考马斯亮蓝染色没问题,但是不知道与Marker对应的条带是否是我要的(我目的蛋白的分子量分别是55KD、29KD)。半干法2小时转膜后,丽春红染色发现大分子量蛋白转过去的较少。

浓缩离心机种类

浓缩离心机种类有多种。1、按分离原理可分:化验室浓缩离心机、三足式浓缩离心机、碟片式浓缩离心机和卧螺浓缩离心机。2、按速度可分:低速浓缩离心机和高速浓缩离心机。3、按分离连续性可分:连续式浓缩离心机和间歇式浓缩离心机。4、按用途可分:生物浓缩离心机、制药浓缩离心机、化工浓缩离心机、食品浓缩离心机、蛋

用于杂交瘤上清液浓缩的关键性样本制备工具

摘要本研究的重点是在进行亲和色谱前使用Vivaflow® 200切向流膜包对多达3 L的鼠杂交瘤澄清上清液进行10倍浓缩。研究发现,同时使用两块Vivaflow® 200 (截留分子量 (MWCO) 30 kDa) 时,抗体回收率始终超过98%,浓缩速度约为20 – 25 mL/分。简介采用杂交瘤技

Western Blot详解(六)

GGG.我想尽量提高转膜的效率(我的实验要求转到膜上的蛋白越多越好,不管是什么大小蛋白)不知道有那些办法?解答:不管怎么转都会存在蛋白转移不完全(电压过小时间过短)或过度转移(电压过大时间过长)的问题,鱼(小分子量蛋白)和熊掌(大分子量蛋白)不可得兼呵呵。建议把胶切成两半,比如以35KD为界,分别进

反渗透膜技术在食品工业中的应用

由于膜分离过程不需要加热,可防止热敏物质失活、杂茵污染,无相变,集分离、浓缩、提纯、杀菌为一体,分离效果高,操作简单、费用低,特别适合食品工业的应用。下面介绍近年来膜分离技术在食品工业中的应用状况。    4.1澄清    澄清工序是澄清汁生产的关键。传统的澄清方法如明胶单宁法、加热凝聚澄清法、冷冻

暴利“乳铁”蛋白忽悠你

核心提示:作为乳汁中一种特有的活性蛋白物质,乳铁蛋白被广泛认为具有调节免疫、抑制病毒和有害菌等作用,其产品也因此受到不少家长的追捧。然而,新京报记者近日走访市场发现,一些所谓的乳铁蛋白粉实质上是带有“乳铁”商标的乳清蛋白固体饮料。这样的普通食品经过摇身一变,售价普遍在300元以上,直逼甚至超过乳铁蛋

独立调查建议恒天然进行33整改 客户赔偿再次被忽略

  继9月初恒天然发布肉毒杆菌事件调查报告,承认塑料部件使奶粉受污后,近日,恒天然董事会独立调查报告再度出炉。   调查报告指出,在风波爆发后的头两个星期,政府和恒天然的应对步调并不一致。针对这次风波,调查提出了33项整改建议。恒天然首席执行官西奥·史必根思先生表示,该报告涵盖范围广泛,内容深入,

蛋白纯化经验指南-2

28) 首先我想问一下agarose和sepharose区别,我的理解是:都指琼脂糖,但agarose是未连接其他介质的,而sepharose是连接其他介质的,不知理解对不对?请指教!Glutathione-agarose(4%cross-linked beaded agarose)和Glutath

中空纤维膜过滤技术在病毒类疫苗中的应用(四)

3.1.3 讨论     使用 Sepharose 4FF分子筛分析柱对浓缩液进行分析,快速检定浓缩液中杂质的残留,并比较病毒和杂质的分离情况,结果见图 5所示。     使用两种不同的超滤膜进行浓缩,所得浓缩液中病毒颗粒的积分面

新西兰称三批次产品涉毒 恒天然将独立调查事件

  恒天然昨天发布声明表示,新西兰政府确认此次乳制品质量问题仅限于使用三批次浓缩乳清蛋白或受其影响的相关产品。昨晚,恒天然发声明表示,恒天然董事会将开展正式独立调查。   称三批次产品涉毒   昨天,新西兰政府确认此次乳制品质量问题仅限于使用三批次浓缩乳清蛋白或受其影响的相关产品,新西兰其他乳制