非标记抗体免疫电镜操作步骤
1．经典法（1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H2 O混悬，用3%磷钨酸(pH6.0)负染20Sec～30Sec，滴加于400目铜网Fomnvar膜上，用滤纸从铜网边缘轻轻吸去多余的负染液。（6）在透射电镜下4×104 倍观察。2．快速法(琼脂扩散法)（1）同经典法(1)、(2)步骤，制备免疫复合物。（2）以生理盐水或pH 7.2巴比妥缓冲液制备1%琼脂糖，趁热浇注于洁净的载玻片上，每片3ml，待冷却凝固后，在凝胶面上等距离放置直径4mm玻璃珠数粒，再于凝胶面上浇注1%琼脂糖2ml～3ml，冷却凝固后，取出玻璃珠，使凝胶形成凹孔。（3）将普通滤纸剪成2×3cm大小，......阅读全文
非标记抗体免疫电镜操作步骤
1．经典法（1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H2
非标记抗体免疫电镜的操作步骤
1．经典法 （1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫 血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H
非标记抗体免疫电镜
原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对
非标记抗体免疫电镜技术
（一） 原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应
非标记抗体免疫电镜技术
一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验
实验方法原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要 本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。 实验原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法
非标记抗体免疫电镜实验技术
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
(一) 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的
非标记抗体免疫电镜技术原理、材料和操作方法
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验——经典法
不标记抗体法通过系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。用于（1）抗体观察（2）免疫学研究。实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有
荧光素标记抗体的操作步骤
FITC荧光素标记抗体的操作步骤 www.runwelltac.com当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键（thiocarbmide）结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖
免疫学技术专题：非标记抗体免疫电镜技术
一、原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的
FITC荧光素标记抗体的操作步骤
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键（thiocarbmide）结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般zui多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下：F
免疫电镜胶体金标记法操作大全
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原 反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫电镜胶体金
非标记抗体免疫电镜实验——快速法(琼脂扩散法)
实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
免疫电镜相关技术实验——酶标记免疫电镜技术
实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物，在不改变抗原抗体的免疫反应特异性，亦不降低酶活性条件下，与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
断裂标记免疫电镜技术（2）
)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸，室温固定2h，系列酒精或丙酮脱水，常规电镜包埋。⑦切半薄片，光镜定位合适的断裂部位，再切超薄切片，铀铅染色，透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术，常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C
断裂标记免疫电镜技术（1）
断裂-标记免疫电镜技术此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用3
断裂—标记免疫电镜技术介绍
此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。（1）临界点干燥法①固定：1.0%～2.5%戊二醛PBS液4℃1～2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用30%的甘油—PBS浸透
免疫电镜相关技术实验——胶体金标记免疫电镜技术
实验材料病毒试剂、试剂盒胶体金仪器、耗材电子显微镜实验步骤免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电
铁蛋白免疫电镜技术原理和操作步骤
实验概要本文介绍了铁蛋白免疫电镜技术的原理、材料试剂和操作方法等。实验原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。主要试剂1．马脾铁蛋白2．硫酸铵3．硫酸镉4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante
铁蛋白免疫电镜技术原理和操作步骤
实验概要本文介绍了铁蛋白免疫电镜技术的原理、材料试剂和操作方法等。实验原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。主要试剂1．马脾铁蛋白2．硫酸铵3．硫酸镉4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。(2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。(3)将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100℃蚀刻1mi
免疫电镜胶体金标记法
第四节 免疫电镜胶体金标记法 金标法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，
简述酶标记抗体的方法步骤
1、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术介绍
（1）新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。（2）PBS（pH7.5）冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。（3）将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100℃蚀刻1min 。（4）制做断裂面复型。
免疫电镜胶体金标记法2
（4）胶体金与蛋白A的结合和纯化，依上法测得所需的比例超过10%，即每30ml胶体中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作为稳定剂，然后以15000r/min离心45min（不同方法制备的金离心速度不同），略带红色的松散的复合物沉淀即为PAg复合物。小心弃去上清液，加入PBS冲洗
免疫电镜胶体金标记法1
金标法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫电镜胶体金标