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用SepPakC18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

本方案介绍的是利用寡核苷酸对于硅胶反相亲和的特性,将放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物分离的方法,本方案的方法只可用于纯化 5'端放射性标记或非标记的含磷酸基团的寡核苷酸,而方案 1 所介绍的方法多用于 5'末端为游离羟基的寡核苷酸。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。试剂、试剂盒乙腈碳酸氢铵TE 溶液放射性标记寡核苷酸仪器、耗材离心干燥机微量离心管放于管架或收集器Sep-Pak 经典层析柱注射器实验步骤材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。乙腈(5%、30% 和 100%)毎个 Sep-Pak C18 柱用 10 ml 髙效液相(HPLC) 级乙腈(100%), 使用前用水稀释乙腈。碳酸氢铵(25 mmol/L,pH8.0)含 5%(WV) 乙腈的碳酸氢铵(25 mmol/L,pH8.0)将 5 ml 乙腈与 95 ml25 mmol/L 碳酸氢铵混合TE 溶液(pH7.6)核酸与......阅读全文

用Sep-Pak C18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

本方案介绍的是利用寡核苷酸对于硅胶反相亲和的特性,将放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物分离的方法,本方案的方法只可用于纯化 5'端放射性标记或非标记的含磷酸基团的寡核苷酸,而方案 1 所介绍的方法多用于 5'末端为游离羟基的寡核苷酸。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册

用Sep-Pak C18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

试剂、试剂盒 乙腈碳酸氢铵TE 溶液放射性标记寡核苷酸仪器、耗材 离心干燥机微量离心管放于管架或收集器Sep-Pak 经典层析柱注射器实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。乙腈(5%、30% 和 100%)毎个 Sep-Pak C18 柱用 10 ml 髙效液相(HPLC) 级乙腈(100

用Sep-Pak C18柱层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

            试剂、试剂盒 乙腈 碳酸氢铵 TE 溶液 放射性标记寡核苷酸 仪器、耗材 离心干

CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

本方案介绍用阳离子去污剂——十六烧基溴化吡啶(cetylpyridinium bromide,CPB) 定量差异沉淀分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物。此方法最初是用于回收磷酸缓冲液从羟磷灰石柱洗脱的 DNA(Geek and Nasz 1983), 也可用于沉淀放射性标记核酸包括寡核

CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

试剂、试剂盒 十六烷基溴化吡啶EDTA-TrisEDTA-Tris-DNA 溶液乙醇-乙酸钠溶液乙醇乙酸钠TE(pH7.6) 或适当的预杂交液核酸和寡核苷酸纯化的原料仪器、耗材 干冰 乙醇浴实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。十六烷基溴化吡啶(CPB)1%,m/V)将 1 gCPBW(s

乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

            试剂、试剂盒 乙酸铵 乙醇 TE 放射性标记的寡核苷酸 纯化的原料 实验步骤

乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

如果放射性标记的寡核苷酸只是用作杂交探针的话,一般不必完全除去未掺入的放射性标记物。然而,为了使本底降至最低,应该将未掺入的大部分放射性标记物与放射性标记的寡核苷酸分离。如果寡核苷酸长度超过 18 个核苷酸(本方案),则绝大部分未反应的放射性前体物质可通过乙醇分级沉淀除去。本实验来源于分子克隆实验指

乙醇沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

试剂、试剂盒 乙酸铵乙醇TE放射性标记的寡核苷酸纯化的原料实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。乙酸铵(1mol/L)乙醇TE(pH7.6)核酸和寡核苷酸放射性标记的寡核苷酸纯化的原料是方案 2(步驟 3 或步骤 5) 的反应混合液,T4 噬菌体多核苷酸激酶巳在 68°C 加热后灭活。方法

CPB沉淀法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

            试剂、试剂盒 十六烷基溴化吡啶 EDTA-Tris EDTA-Tris-DNA 溶液 乙醇-乙酸钠溶液 乙醇 乙酸钠 TE(

大小排阻层析法纯化放射性标记的寡核苷酸实验

放射性标记的寡核苷酸用于酶促反应如引物延伸反应时,需要完全除去未掺入的放射性标记物。本方案介绍的是利用大小排阻层析时寡核苷酸与单核苷酸移动速率差异,分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物的方法。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。 试剂、试剂盒