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氨基酸序列测定实验

实验方法原理 实验材料 分离胶和积层胶溶液还原型谷胱甘肽干粉试剂、试剂盒 4 × 凝胶缓冲液10 × 下槽缓冲液10 × 上槽缓冲液甲醇转移缓冲液0.1%(V/V)考马斯亮蓝的 50%甲醇溶液10%(V/V)乙酸的 50%甲醇溶液仪器、耗材 微量注射器或凝胶加样吸头PVDF 膜小型电转装置自动蛋白质测序仪实验步骤 1. 如蛋白质电泳实验中所述,以分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。在加入过硫酸铵和 TEMED 之前脱气,小心不要在转移或吸取液体时把空气带入聚合混合物中。如果加样孔不是矩形和结实的,则需重新灌制。2. 组装垂直凝胶电泳装置。3. 将 80 ml 4 × 凝胶缓冲液稀释至 320 ml(总浓度是 1 × 凝胶缓冲液)。将 200 ml 1 × 凝胶缓冲液倒入下层缓冲液槽。剩余的 1 × 凝胶缓冲液加入还原型谷胱甘肽(干粉)至终浓度 1 mmol/L,将它们倒入上层缓冲液储槽。4. 将凝胶连接于恒压/恒流电源。每块胶 ......阅读全文

单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定 三

经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子质量分布图(图 3),根据单抗的氨基酸序列理论分子质量进行计算,将观察到的质谱峰进行归属,可以初步推断该单抗药物存在多种形式的糖链结构,主要包括 G0、G0F、G1F 和 G2F,该结论与常见的单抗组成基本

蛋白质测序

Edman降解法             实验方法原理 主要有质谱法,利用蛋白质测序仪进行测序以及利用蛋白质对应DNA或m

蛋白质测序——Edman降解法

蛋白质测序可用于: (1)鉴定蛋白质; (2)表征蛋白质翻译后修饰。 (3)分析蛋白质一级结构与功能的关系。实验方法原理主要有质谱法,利用蛋白质测序仪进行测序以及利用蛋白质对应DNA或mRNA进行间接测序。传统的蛋白质测序实验一般包括以下步骤:1.肽链的拆开和分离;2.测定蛋白质分子中多肽链的数目;

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

蛋白质组技术的研究进展

大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信息仅

盘绕螺旋结构的设计和优化技巧实验

虽然表观上简单,盘绕螺旋(coiled coil ) 模体是高度专一的,并在理解三级结构及其形成方面具有重要意义。最常观察到的盘绕螺旋形态——平行二聚态,其一般的结构类型仍有待全面的描述。尽管如此,其结构已呈现出在某些特定位置需要某些特定类型氨基酸的严格规则。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德

蛋白质组鉴定技术简述

如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定。在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达。并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时、耗力,不

几种常用的蛋白鉴定方法

几种常用的蛋白鉴定方法 传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的 comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。 目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基

几种常用的蛋白鉴定方法

传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。 目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。1 &nb

蛋白质组鉴定技术

 如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时

几种常用的蛋白鉴定方法

 传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。 目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术

四种蛋白鉴定分析方法

传统的蛋白鉴定方法,色谱柱如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。 目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。1&nb

《自然》封面:新方法根据结构预测功能

来自美国加州大学旧金山分校药理化学系,得克萨斯农工大学(Texas A&M University),Albert Einstein 医学院的研究人员利用一种变通的分子对接方法(一种用来寻找潜在药物的计算机辅助的模拟方法),设计出一种根据结构来预测某种具有未知活性的酶的功能的方法。如果这一新方

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(一)

  通过生物化学实验应该做到:    ⑴ 学习设计一个实验的基本思路,掌握各个实验的基本原理,学会严密地组织自己的实验,合理地安排实验步骤和时间。    ⑵ 训练实验的动手能力,学会熟练地使用各种生物化学实验仪器,包括各种天平、各

蛋白质组技术的研究进展(二)

3 蛋白质组技术的支柱---鉴定技术(Identification)    如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定.  在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comi

四种蛋白鉴定分析方法

传统的蛋白鉴定方法,色谱柱如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达 通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。   目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质

吉大校友《PNAS》文章解析蛋白折叠新理论

【分子伴侣】 1978 年,Laskey 在进行组蛋白和DNA 在体外生理离子强度实验时发现,必须要有一种细胞核内的酸性蛋白———核质素(nucleoplasmin) 存在时,二者才能组装成核小体,否则就发生沉淀。据此Laskey 称它为“分子伴侣”。分子伴侣是指能够结合和稳定另外一种蛋白质的

盘绕螺旋结构的设计和优化技巧实验

盘绕螺旋结构的设计和优化技巧             实验步骤 本节讨论盘

生物质谱技术在蛋白质组学中的应用

  一、 前言[1,2]   基因工程已令人难以置信的扩展了我们关于有机体DNA序列的认识。但是仍有许多新识别的基因的功能还不知道,也不知道基因产物是如何相互作用从而产生活的有机体的。功能基因组试图通过大规模实验方法来回答这些问题。但由于仅从DNA序列尚不能回答某基因的表达时间、表达量

中山大学完成3个脊椎动物虹彩病毒全基因组序列测定和分析

  日前,中山大学海洋学院教授何建国及其项目组完成了3个脊椎动物虹彩病毒全基因组序列的测定和分析。在此基础上,他们提出了虹彩病毒的一个新属,并找到该病毒里3个与鱼类免疫信号传导系统相互作用的基因。在鳜鱼(俗称桂花鱼)、石斑鱼、大黄鱼等多种养殖鱼类中频繁流行,对鳜鱼的致死率接近100%,对石斑鱼、美国

何建国小组提出鱼类虹彩病毒新属

  在NSFC-广东联合基金重点项目的资助下,中山大学海洋学院教授何建国项目组完成3个脊椎动物虹彩病毒全基因组序列的测定和分析。在此基础上,他们提出了虹彩病毒的一个新属,并找到该病毒里3个与鱼类免疫信号传导系统相互作用的基因。   在鳜鱼、石斑鱼、大黄鱼等多种海淡水养殖鱼类中频繁流行,对鳜鱼(

解码“基因组学之父”桑格:测序,测序,测序

  “桑格当之无愧地被称为‘基因组学之父’,他的工作为人类读取和理解基因代码奠定了基础,彻底变革了生物学并极大促进了当今的医学发展。”、   有一天,65岁的英国生物化学家弗雷德里克·桑格(Frederick Sanger)突然停下手中的试验,转身走出实验室,宣布自己正式退休。那一年是1983

cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件

实验步骤 一、材料 所有化学试剂均为分子生物学级纯度。所用塑料和玻璃制品,包括瓶子和移液器吸头均经高压蒸气灭菌。涉及核酸的操作均需带手套。 1.总 RNA提取 (1)无 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙

自动定氮仪测定稻米中蛋白质

  蛋白质是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,细胞和生物体在完成由基因编码的生命活动过程中需要许多不同的蛋白质协同作用,蛋白质是细胞做功的工具,与生命的起源和进化都密切相关。所以食品中蛋白质的多少,不仅表示食品的质量,也关系着人体健康。食品中蛋白质含量高低是评价食物营养成份的主要指标之一。稻

cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件下,...(二)

8 标记探针的合成9 Northern 印迹(1)10X MOPS 缓冲液: 200 mmol/L MOPS, 50 mmol/L 乙酸納, 10 mmol/L EDT A , pH 7. 0。(2)I. 25% 甲醛变性胶:将 3.75 g 琼脂糖溶于 217 m L 双蒸水中,加 E B 至

cDNA文库的构建和筛选

材料许多生物是疾病研究或探索使细胞和机体应对和存活于不同刺激下的分子适应机制的优良模型。 cDNA 文库的构建和随后目的基因的筛选可促使研究者发现在调节和响应某些外部特定环境压力中有重要作用,而在其他体系中可能不表达或者不存在的新基因。确定这些新基因的可读框,进一步分析其编码蛋白质的功能可以开创全新

蛋白质质谱鉴定技术概述及常见问题

蛋白质(Protein)是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,存在于所有生物细胞,作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用,因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。现代研究结果发现越来越多的多肽同蛋白质一样

利用消化炉和定氮仪对稻米中蛋白质进行研究

蛋白质是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,细胞和生物体在完成由基因编码的生命活动过程中需 要许多不同的蛋白质协同作用,蛋白质是细胞做功的工具,与生命的起源和进化都密切相关。所以食品中蛋白质的多少,不仅表示食品的质量,也关系着人体健康。 食品中蛋白质含量高低是评价食物营养成份的主要指标之一。稻

PK-120 cDNA 克隆实验

实验方法原理 实验材料 cDNA试剂、试剂盒 Ready-To-Go DNA 标记试剂盒人肝脏 λgt11 cDNA 文库人肝脏 λgt10 cDNA 文库杂交溶液SSC 溶液pBluescript II SK 载体仪器、耗材 PCR 扩增仪实验步骤 

PK-120 cDNA 克隆实验

基本方案             实验方法原理 实验材料