抗体的制备方法与原理
一、抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。 （二）免疫途径 免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注......阅读全文
抗体的制备方法与原理
一、抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如
抗体的制备方法与原理2
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，
本生详解抗体的制备方法与原理
抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好(特异性强和效价高)的抗体。 (一)用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如般
单克隆抗体制备过程与原理
单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤，下面讲简要介绍。1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠
RNAi实验原理与制备方法（二）
3.用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录
RNAi实验原理与制备方法（一）
实验原理通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称
卵黄抗体制备的实验原理
通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。卵黄抗体在临床上应用较为广泛，其优点是鸡蛋比动物血清更容易获得，且卵黄中抗体含量较高。禽类的免疫器官法氏囊主要控制机体的体液免疫，机体的免疫应答发生后，体液中成熟的骨髓依赖性淋巴细胞受相关免疫
单克隆抗体的制备原理
单克隆抗体技术原理如下：由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交
卵黄抗体制备的实验原理
通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。卵黄抗体在临床上应用较为广泛，其优点是鸡蛋比动物血清更容易获得，且卵黄中抗体含量较高。禽类的免疫器官法氏囊主要控制机体的体液免疫，机体的免疫应答发生后，体液中成熟的骨髓依赖性淋巴细胞受相关免疫
多克隆抗体的制备方法
一、器材 剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直头眼科手术剪（剪血管用）一把，手术刀架，手术刀片，注射器（1ml、 10ml，25ml）附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶（200ml）或平皿（直径18cm）、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等
抗体酶的制备方法
1、杂交瘤技术经体内免疫后再进行细胞融合是制备抗体酶的一种传统方法。杂交瘤技术的基本原理是用不能在培养液中生长的但能产生抗体的脾脏细胞，与能在培养液中生长的骨髓瘤细胞进行融合，融合得到的杂交细胞既能产生抗体又能在体外培养，通过选择培养，以获取能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。再把这些细胞单克隆化，即繁殖
人工制备抗体制备方法有哪些
抗体在疾病的诊断和免疫防治中的重要作用，使人们对抗体的需求越来越大。人工制备抗体是大量获得抗体的重要途径。早年人工制备抗体的方法主要是以相应抗原免疫动物，获得抗血清。由于抗原常常含有多种不同的抗原表位，加之所获得的抗血清也未经免疫纯化，因此，获得的抗血清实际上是含多种抗体的混合物，即多克隆抗体(po
单克隆抗体制备的基本原理与过程
单克隆抗体制备的原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤
单克隆抗体的制备原理简介
原理1：单克隆抗体（MAb）与抗血清（又称多克隆抗体，PAb）最主要的区别是MAb为单一种B细胞克隆所产生的一种均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B细胞克隆的标志，是一种独特型的抗体，它的特异性是针对一个抗原决定簇的。制备单克隆抗体不能用化学分离的方法从多克隆抗体中去分离纯化得到它，而是用分离产
抗体酶的制备方法介绍
1、杂交瘤技术经体内免疫后再进行细胞融合是制备抗体酶的一种传统方法。杂交瘤技术的基本原理是用不能在培养液中生长的但能产生抗体的脾脏细胞，与能在培养液中生长的骨髓瘤细胞进行融合，融合得到的杂交细胞既能产生抗体又能在体外培养，通过选择培养，以获取能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。再把这些细胞单克隆化，即繁殖
抗体酶的制备方法介绍
1、杂交瘤技术经体内免疫后再进行细胞融合是制备抗体酶的一种传统方法。杂交瘤技术的基本原理是用不能在培养液中生长的但能产生抗体的脾脏细胞，与能在培养液中生长的骨髓瘤细胞进行融合，融合得到的杂交细胞既能产生抗体又能在体外培养，通过选择培养，以获取能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。再把这些细胞单克隆化，即繁殖
抗体的制备
为了研究抗体的理化性质、分子结构与功能，以及应用抗体于临床疾病的诊断、治疗及预防都需要人工制备抗体。目前，根据制备的原理和方法可分为多克隆抗体、单克隆抗体及基因工程抗体三类。 一、多克隆抗体 大多数抗原是由大分子蛋白质组成，但只是抗原上有限部位的特殊分子结构能与其相应抗体结合，称此部位为抗原
单个B细胞抗体制备技术原理
单个B细胞技术是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术，是根据每一个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列，以及每一个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性B细胞，通过单细胞PCR技术从单个抗体分泌B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区
单克隆抗体的制备方法2
（2）饲养细胞：在组织培养中，单个或少数分散的细胞不易生长繁殖，若加入其它活细胞，则可促进这些细胞生长繁殖，所加入的这种细胞数被称为饲养细胞。在制备McAb的过程中，许多环节 需要加饲养细胞，如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中，加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有：小鼠腹腔巨噬细胞（较
单克隆抗体的制备方法1
动物的选择与免疫 1．动物的选择 纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。 2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在
单克隆抗体的制备方法3
（4）融合 ①将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml离心管中用无血清不完全培养液洗1次，离心，1200rpm,8min;弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇（PEG）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。 ②90s内加入37℃预温的1ml 45%PEG
单克隆抗体的制备方法4
（5）在第7天换液，以后每2～3天换液1次。 （6）8～9天可见 细胞克隆形成，及时检测抗体活性。 （7）将阳性孔的细胞移至24孔板中扩大培养。 （8）每个克隆应尽快冻存。 2．软琼脂培养法克隆 （1）软琼脂的配制：含有20%NCS（小牛血清）的2倍浓缩的RPMI1640。
卵黄抗体制备的操作方法
1.实验动物的选择：选择健康、产蛋率高的蛋鸡，购进后饲养1周左右，观察其健康情况。2.抗原的准备：免疫抗原有多种选择，一般采用灭活的病原体，也可以选择激素类、蛋白类物质，使用前可以选用弗氏完全佐剂乳化抗原。 3.动物免疫：免疫方式主要有口鼻接种、皮内接种、皮下接种、肌肉注射、腹腔注射以及静脉注射。禽
卵黄抗体制备的操作方法
1.实验动物的选择：选择健康、产蛋率高的蛋鸡，购进后饲养1周左右，观察其健康情况。 2.抗原的准备：免疫抗原有多种选择，一般采用灭活的病原体，也可以选择激素类、蛋白类物质，使用前可以选用弗氏完全佐剂乳化抗原。 3.动物免疫：免疫方式主要有口鼻接种、皮内接种、皮下接种、肌肉注射、腹腔注射以及静脉注射。
抗体酶的特点和制备方法
抗体酶具有典型的酶反应特性；与配体(底物)结合的专一性，包括立体专一性，抗体酶催化反应的专一性可以达到甚至超过天然酶的专一性；具有高效催化性，一般抗体酶催化反应速度比非催化反应快104～108倍，有的反应速度已接近于天然酶促反应速度；抗体酶还具有与天然酶相近的米氏方程动力学及pH依赖性等。将抗体转变
大量单克隆抗体的制备方法
目前制备大量单克隆抗体的方法主要有两种：一种是动物体内诱生法；另一种是体外培养法。 背景BACKGROUND 困惑PUZZLED 体外培养法有哪几种培养方式？何谓无血清培养？探索在体外培养法中,目前各个实验室普遍采用细胞单层法,就是将杂交瘤细胞加入培养瓶中，用完全培养基培养，细胞浓度以1.0X100
单克隆抗体培养上清与腹水的制备—上清的制备
实验步骤材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)杂 交 瘤（单 元 1.3)V DMEM-IO 完全培养基175 cm2 组织培养用细颈瓶50m l 塑料锥底离心管，无菌Beckman 离心机和 TH-4 转 子（或同等设备）1.将杂交瘤细胞移入含有 DMEM-IO 完全培养基的 175 cm2 培
荧光抗体的制备
1 荧光素与抗体结合（标记） 2 荧光抗体的纯化 3 荧光抗体的鉴定 1.荧光素与抗体结合方法： ⑴ 透析法：①适用于蛋白质含量低、样品体 积小的抗体溶液的标记 ②标记较均匀，非特异荧光较低 ⑵ 搅
单克隆抗体制备中两次筛选的方法及原理
第一次筛选的原理与方法 细胞融合后 杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键 普遍采用的HAT选择培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H） 氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）其依据是细胞中的DNA合成有两条途径是生物合成途径（D途径）即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 为DNA分子的
鼠源单克隆抗体制备原理
鼠源单克隆抗体制备原理是一种从鼠源抗体库中制备单克隆抗体的技术，它首先需要将鼠源抗体从细胞中分离出来，然后经过PCR扩增其VH和VL基因片段，再把这些片段构建成单克隆抗体的基因载体，最后将其转染到细菌或哺乳动物细胞中，通过筛选和纯化步骤来获得单克隆抗体的纯化产物。首先，将鼠源抗体从细胞中分离出来，可