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实验步骤材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)杂 交 瘤（单 元 1.3)V DMEM-IO 完全培养基175 cm2 组织培养用细颈瓶50m l 塑料锥底离心管，无菌Beckman 离心机和 TH-4 转 子（或同等设备）1.将杂交瘤细胞移入含有 DMEM-IO 完全培养基的 175 cm2 培养瓶中。培养至生长旺盛和准备细胞分瓶时取用（细胞密度应达到 IXlO6〜2 X 106 个细胞/ml)。避免细胞生长密度过高导致死亡。2.以 1 :1 0 的比例分出部分细胞至另一个 175 cm2 培养瓶中。加 入 DMEM-IO 完全培养基 至 总 体 积 100 ml，培养至细胞过度生长，培 养 基 呈 黄 色（酸性），出现死亡细胞(大约 5d)。或者，将 高 密 度 细 胞（IXlO6〜2 X 106 个细胞/ ml) 随新鲜培养基转入培养瓶，培 养 2〜3d 直到出现死亡细胞......阅读全文
实验步骤基 本 方 案 1 塑 料 黏 附 和E A 玫 瑰 花结 富 集DC此种技术用于分离DC已经使用了很多年，其间只经过了微小的修改（Steinman衫aZ.， 1979)材 料（带V 项 目 见 附 录 1)胶原酶消化的脾脏细胞悬液（见辅助方案）高密度牛血清白蛋白（BSA) 溶液R P M
实验步骤基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗体的制备材料B S A -琼 脂 糖 亲 和 基 质（Sigma) 填 装（如辅助方案 2 ) 于柱床体积IOml的层析柱磷酸化酪氨酸亲和基质层析柱（IOml 柱床体积；见辅助方案3)磷酸肽-B S A 偶联物免疫家兔的粗制血清PB S /叠氮钠.•含有0
1.将2 管 I m l 的 4000U /m l 胶 原 酶 D 稀 释（足够用于2 0 个脾脏）： Im l 加 入 9m l H B S S(稀 释 至 400U /m l ，步 骤 8 使用）， I m l 加 入 39m l 的 H B S S (稀 释 至 100U /ml)。置
实验步骤基 本 方 案 1 未 致 敏 T 淋巴细胞的活化材 料备选方案1 用抗体激活未致敏的T 细胞这种方法适用于当抗C D 3/T C R 复合物抗体不能有效结合小鼠辅助细胞上的F c 受体 ，或其可溶形式不能有效活化T 细胞时。值得注 意 的 是 ，在 某 种 抗 体（如 抗 G 7、Thy-
实验步骤一、材料1. 胞质分裂阻滞微核试验2. 微核的着丝点检测(1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。(2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。(3) 过氧化物酶标记的兔抗人 I g G 。(4) 二胺基联苯溶液（D A B ): I m g /m L 溶于
实验步骤 一、材料 1. 胞质分裂阻滞微核试验 2. 微核的着丝点检测 (1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。 (2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。 (3) 过氧化物酶
实验步骤基本方案材 料抗 凝 血（附 录 3 G) ， 或 者 从 全 外 周 血 中（单 元 8 . 1 ) 或 组 织 中（单 元 7. 8 ) 分离的新 鲜 PBM C 或冷藏保存的 PBMC (附录 3B)1 % FBS (热灭活）溶于冷的 PBS (附 录 1 ，无钙离子）中免疫磁珠偶联的
实验步骤基本方案 FcY 受体介导的吞噬作用材 料原代巨噬细胞或巨噬细胞株（单 元 6.1 和 8. 5)R P M I -5 完 全 培 养 基（或其他培养基）绵 羊 红 细 胞（S R B C ) ，用 Alsever 溶 液 I : I (V /V ) 稀 释（附 录 1)生理盐水： 0. 9
基本方案 FcY 受体介导的吞噬作用材 料原代巨噬细胞或巨噬细胞株（单 元 6.1 和 8. 5)R P M I -5 完 全 培 养 基（或其他培养基）绵 羊 红 细 胞（S R B C ) ，用 Alsever 溶 液 I : I (V /V ) 稀 释（附 录 1)生理盐水： 0. 9 % (
重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及
实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或
基本方案 一 种 抗 原 加 工 处 理 和 呈 递 的 检 测 体 系材 料具有增殖能力的（如转化的 B 细胞）或非增殖的且与 T 杂交瘤细胞 M H C 匹配的抗原呈递细胞（单 元 7.1)D M E M -1 0 完全培养基， 37°C对数生长期的 T 杂交瘤细胞抗原：溶解于水的蛋白质或多肽（
实验步骤基本方案 一 种 抗 原 加 工 处 理 和 呈 递 的 检 测 体 系材 料具有增殖能力的（如转化的 B 细胞）或非增殖的且与 T 杂交瘤细胞 M H C 匹配的抗原呈递细胞（单 元 7.1)D M E M -1 0 完全培养基， 37°C对数生长期的 T 杂交瘤细胞抗原：溶解于水的蛋白质
环境污染物可以影响许多胞内酶活性。酶抑制因子对蛋白质组的影响可以利用双向电泳来确定。在神经内分泌细胞中，前体蛋白转化酶 1 和 2 (proprotein convertase 1 和2, P C l 和 PC2 ) 介导许多蛋白质前体水解为肽激素和神经肽。这些钙离子依赖的蛋白酶的活性可以被环境中的
3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死，在无菌操作下取组织，放 在 4°C无血清培养基中，最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
第一节 微生物形态学检查 细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查 由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电
随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感
实验步骤基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用
基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用）V D
实验步骤 一、材料 1 细胞培养和裂解 （1）小鼠脑垂体 AtT20 和 AtT20 (proSAAS) 细胞系。 AtT20 .(proSAAS) 细胞系通过用包含一个新霉素抗性基因的 proSAAS 表达载体转染 A
特等奖通用项目1项 序号 获奖编号 项目名称 主要完成人 完成单位及名次（未注明则为独立完成单位） 1 J-210-0-01 大庆油田高含水后期4000万吨以上持续稳产高效勘探开发技术 大庆石油学院（3），中国石油大学（北京）（4），中国地质大学（武汉）（5），清
实验步骤抗 体 夹 心 ELISA 法检测可溶性抗原该检测方法比抗原直接结合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2〜5 倍（图 I.1. 3)。附 加 材 料（其他材料见基本方案）特 异 性 抗 体（单 克 隆 或 多 克 隆 ）或 者 来 自 抗 血 清 、腹 水 或 杂 交 瘤 上 清 液（单
为了消灭猪瘟，需要快速而确实的诊断技术。流行病学、症状学和病理解剖学等方 面的资料，具有重要的参考价值，但确诊必须采取病料，进行病毒的分离鉴定或作抗体 测定。 疫情调查时，除需注意流行情况,还应了解是否已经进行免疫接种， 所用疫苗有无 残余毒力?非典型猪瘟在成年猪中大多表现为轻症疾病
实验步骤基本方案通过蔗糖梯度浮选 法 制备 去 污剂 抗 性的 膜 并 通 过免 疫 印 迹 对蛋 白质进行分析材 料细胞，贴壁或非贴壁N E /P 缓冲液，单独或包含以下一种或多种组分：1 % 、 2 % 或 5 % (W V ) TritonX-IOO0.lmol/L 碳酸钠， pHll5 %
08年中科院院长奖、导师奖、优博论文及各类奖学金揭晓 根据中科院人教局科发人教字〔2008〕192号、194号和26号文件通知，2008年中科院各类奖学金、奖教金和优博论文经各单位评审推荐和中科院研究生院初评，最后中科院人教局组织终审，现结果已全部揭晓。获奖名单如下： 一、中国科学院院长特别奖(
2 用阿糖胞苷微核实验检测人淋巴细胞 (V G 1 期 DNA 剪切修复损伤的方法在对暴露于各种遗传毒物的人 G 。期淋巴细胞的 M N 进行检测后发现，对于主要引起碱基损伤和 DNA 加合物而不是 DNA 链断裂或者纺锤体损伤的化学物质和紫外辐射而言， MN 的形成与细胞毒性相比明显程度较
4 免疫印迹（1） 硝酸纤维素膜（Bio-Rad)。（2）Towbin 缓冲液： 25 mmol/L Tris, 192 mmol/L 甘氨酸， 0.1% SDS， 2 0 % (V/V) 甲醇。（3）IX T ris 缓 冲 盐 溶 液（1XTBS): 10 mmol/L Tris-. HCl，
基 本 方 案 淋 巴 细 胞 的 CFSE 标记材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)实验动物，人外周血或者培养的淋巴细胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 盐 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 热 灭 活 F B S 的 P B S5m m
实验步骤基 本 方 案 淋 巴 细 胞 的 CFSE 标记材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)实验动物，人外周血或者培养的淋巴细胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 盐 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 热 灭 活 F B S 的 P B S