方案8用FRET法分析体内蛋白质的相互作用实验

FLIMFRET应用浅析

FRET 技术（Fluorescence Resonance Energy Transfer）能够在突破传统光学分辨率极限的条件下研究蛋白互作、构象变化（

荧光共振能量转移（FRET）

一、活细胞研究遇到的问题：蛋白质或其他分子在活细胞内互相结合的时间和地点是了解它们功能的关键问题。要回答这一问题，需将蛋白质标上不同的荧光团。但是，光学显微镜的分辨率将蛋白质检测精度限制在大约0.2μm左右。要研究蛋白质成分的相互物理作用，需要高的分辨率。二、什么是FRET？FRET就是采用非放射方

多肽FRET荧光标记技术

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简

单分子荧光成像概述：TIRF和FRET

经典的生物研究技术侧重于分子和细胞集群的研究——即研究含有大量相同形态或功能的分子或细胞的活动。但是，这种方法会忽略集群中的单个分子或子群的特异性。事实上在细胞周期的不同阶段或在不同的环境中，单个分子或细胞的活动很可能与集群表现出的整体活动不同。要对单个分子或亚群的活动进行观察，必须严格控制实验条件

生物医学研究新工具：FLIMFRET

目前，大多数生物探针都是基于荧光。荧光探针亮度的增加或减少取决于其浓度。但是，荧光强度不仅受研究对象浓度的影响，还受照明强度、光漂白以及基质吸收和阴影效应等。为了尽量避免这些问题，科学家倾向于优先选择比率染料（ratio-dyes），因为其允许对背景的干扰进行校准。尽管如此，基于荧光强度的测量并不是

蛋白互作研究技术：「FRET」VS「Duolink－PLA」

荧光能量共振转移 （FRET）检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具，广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。原理当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在 10nm 范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即 FRET 现象

FLIMFRET生物传感器介绍

荧光寿命成像（FLIM）与Förster共振能量转移（FRET）相结合，已被证明非常有利于生物医学研究中各种结构和细胞动态变化的研究。因为FRET信号强烈依赖于FRET配体和受体的距离，所以FRET允许监测分子相互作用。这允许研究分子的相互作用，如配体-受体复合物，蛋白质-蛋白质相互作用、效应蛋白与

快速FRET血清检测技术应用于乳糜泻诊断

　　近日，赫尔辛基大学的研究人员开发了一种新颖的诊断方法，称为RFS（快速FRET血清诊断），用于快速现场测量患者样品中的抗体。这项技术可以彻底改变微生物，自身免疫和过敏性疾病的血清学诊断现状。　　如今，这组研究人员已将新概念应用于乳糜泻的诊断，这是一种大多数患者不了解的腹腔疾病。（图片来源：Www

FLIMFRET在病毒侵染动态研究中的应用

2020年， “病毒“这个词反复出现在公众的视野里。当我们在感慨着病毒凶猛、人类渺小和生命无常的同时，对于病毒以及相关的研究技术，我们又了解多少呢？研究难点病毒是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸（DNA或RNA）、必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。而病毒侵染宿主细胞却是一个非常复

LVF光栅在FRET和BRET分析中的优异表现

在多功能酶标仪中，为了分离某一特定波长的单色光我们有两种技术选择——滤光片或者光栅。与光栅相比，滤光片系统往往具有更好的灵敏度，因为滤光片具有更好的透光率和更宽的带宽。而光栅系统的好处是可以提供波长选择的灵活性，不需要购买或安装特定波长的滤光片。尽管如此，很多用户都发现许多应用在光栅系统上达不到理想

徕卡FLIMFRET在病毒侵染动态研究中的应用

病毒侵染动态研究莫发愁，徕卡FLIM-FRET显身手齐瑶研究难点病毒是一种个体微小、结构简单、只含一种核酸（DNA或RNA）、必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。而病毒侵染宿主细胞却是一个非常复杂的过程，主要分为吸附（Attachment）、进入（Entry/Penetration）、

FRET成像在生物医药领域中的应用（二）

接下来通过该生物敏感器，作者成功实现了在活细胞内对Aurora kinaseA时空激活调控的观察，证明其在G1时期被激活，并通过TPX2和CEP192蛋白协同调节微管的稳定性。图4 TPX2和CEP192在G1时期激活GFP-AURKA-mCherry。Aurora kinase A是公认的治疗

FRET成像在生物医药领域中的应用（一）

随着显微成像技术的发展，科研工作者对成像分辨率的要求越来越高，为此Leica在最新一代SP8共聚焦显微镜的基础上相继推出了超高分辨的STED和高分辨的Hyvolution；另一方面，简单的图像采集和分辨率的提升已经不能满足很多科研工作者的需求，他们需要更高级更强大的成像功能与图像处理功能。LAS

高内涵——基于FRET分析活细胞中的ERK信号转导

Extracellular signal-regulated kinase（ERK）是胚胎发生，细胞分化，细胞增殖和细胞死亡调控的关键组成部分。ERK途径起源于质膜中的活化受体，并通过Ras/Raf/MEK至ERK（图1）。 图1. Ras/Raf/MEK/ERK信号级联将信号从细胞表面受体如EGF

适用于TRFRET的荧光染料：trFluor－链霉亲和素

时间分辨荧光：理论上，荧光是最灵敏的检测手段，由于许多分子间和分子内的变化会改变标记物的荧光发射。因此，很早就把它作为均相分析技术可能的新的手段。而现在偏振，淬灭，时间关联，荧光寿命改变以及荧光共振能量转移（FRET）已经被广泛应用在对分子间作用的研究中。在生物溶液或血清中的很多化合物和蛋白质是自发

生物医学研究新工具：FLIMFRET生物传感器

荧光寿命成像（FLIM）与Förster共振能量转移（FRET）相结合，已被证明非常有利于生物医学研究中各种结构和细胞动态变化的研究。因为FRET信号强烈依赖于FRET配体和受体的距离，所以FRET允许监测分子相互作用。这允许研究分子的相互作用，如配体-受体复合物，蛋白质-蛋白质相互作用、效应蛋白与

方案8－用－FRET－法分析体内蛋白质的相互作用实验

实验材料a-GFP 抗体编码 CFP 和 YFP 的 DNA酵母细胞株系试剂、试剂盒分子生物学试剂合成的完全液体培养基酵母操作试剂编码目标内源蛋白的 DNA 片段仪器、耗材滤光镜装置图像分析软件显微镜设备分子生物学和酵母操作用的标准设备实验步骤一、实验设计因为体内 FRET 实验的复杂性，要获得有效

欢迎加入“新一代光栅酶标仪实现高灵敏度FRET和BRET检测”

荧光共振能量转移FRET肽和寡核苷酸荧光标记的应用2

       FRET原理        荧光共振能量转移（FRET）是一种物理现象，在生物医学研究和药物发现中已经越来越流行。FRET是能量从供体分子（donor）到受体分子（acceptor）的无热量传输。供体分子是最初吸收能量的荧光基团，而受体是随后转移能量的荧光基团，这种共振相互作用发生

荧光共振能量转移FRET肽和寡核苷酸荧光标记的应用1

     荧光染料标记的肽和寡核苷酸是生化和细胞研究中的重要工具，目前荧光肽和寡核苷酸已广泛用于所有主要类型的荧光成像中，包括荧光共振能量转移（FRET），这些标记的生物分子被广泛用于基于分子信标和其他技术的传染病诊断。FRET肽和寡核苷酸也已通过荧光相关细胞分选（FACS）用于细胞分析，用于体内或

绿色荧光蛋白在信号转导中的应用

　　新近研究发现，某些突变的 GFP 能够发生荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer,FRET）。FRET 是一种从荧光分子的激发状态到临近基态接受分子之间量子力学能量转移的现象。FRET 发生的前提条件是，荧光接受分子必须在荧光提供分子释放

生物大分子相互作用检测技术新进展

荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer，FRET)，是指能量从一种受激发的荧光基团 (fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象。FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数，并对此距离十分敏感，它的有效

三色荧光级联荧光共振能量转移技术

荧光共振能量转移(fluorescence resonance energytransfer，FRET)，是指能量从一种受激发的荧光基团(fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象.FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数，并对此距离十分敏感，它的有效响应距离一

荧光共振能量转移的简介

　　当一个荧光分子（又称为供体分子）的荧光光谱与另一个荧光分子（又称为受体分子） 的激发光谱相重叠时, 供体荧光分子的激发能诱发受体分子发出荧光, 同时供体荧光分子自身的荧光强度衰减。FRET 程度与供、受体分子的空间距离紧密相关, 一般为7～10 nm 时即可发生FRET； 随着距离延长, FRE

荧光共振能量转移的特点

当一个荧光分子（又称为供体分子）的荧光光谱与另一个荧光分子（又称为受体分子） 的激发光谱相重叠时， 供体荧光分子的激发能诱发受体分子发出荧光， 同时供体荧光分子自身的荧光强度衰减。FRET 程度与供、受体分子的空间距离紧密相关， 一般为7～10 nm 时即可发生FRET; 随着距离延长， FRET呈

比率检测氯化钡诱导的大鼠嗜碱性白血病细胞上...（一）

比率检测氯化钡诱导的大鼠嗜碱性白血病细胞上内向整流钾通道（Kir）的变化 简介 FLIPRTETRA和电压敏感探针：比率检测氯化钡诱导的大鼠嗜碱性白血病细胞上内向整流钾通道（Kir）的变化。离子通道和转运体是位于细胞膜上调控离子穿过生物膜的蛋白质。对这些蛋白质的研究已经引起了心律失常、高

新型血糖传感器！高灵敏性的同时具有极佳的抗干扰性

　　近几十年，糖尿病的患病率逐年攀升，糖尿病在世界各地都正成为日益严重的公共健康问题。在预防、诊断和治疗糖尿病方面，定期监测血糖水平一直被公认为疾病评估和管理的重要手段。在过去的几年中，对于血糖检测，大多数研究人员关注的是基于酶的电化学传感器的开发，然而该方法还需要克服一些缺点：包括复杂的酶净化过程

裴钢院士国际期刊发表老年痴呆研究新成果

　　来自中国科学院上海生命科学研究院的研究人员，采用荧光寿命成像显微镜（FLIM）和荧光共振能量转移（FRET）技术，揭示出γ-分泌酶（γ-Secretase）调节剂和抑制剂可诱导Presenilin 1 （PS1）不同的构象改变。这项研究发表在近期的《Journal of Alzheimer"s

裴钢院士国际期刊发表老年痴呆研究新成果

　　来自中国科学院上海生命科学研究院的研究人员，采用荧光寿命成像显微镜（FLIM）和荧光共振能量转移（FRET）技术，揭示出γ-分泌酶（γ-Secretase）调节剂和抑制剂可诱导Presenilin 1 （PS1）不同的构象改变。这项研究发表在近期的《Journal of Alzheimer's

“量子点”——点亮新的艾滋病毒和埃博拉病毒治疗方法

2016年3月15日，利兹大学官网发布了有关量子点技术用于病毒作用机制研究的新闻，标题为“’Quantum dots’ light the way for new HIV and Ebola treatment”（“量子点”点亮新的艾滋病毒和埃博拉病毒治疗方法）。利兹大学的一支研究团队利用量