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DNA的纯化浓缩与定量

实验目的 将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒萃取以除去蛋白质及其它成分,就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤,DNA和RNA不溶于有机溶媒中,而溶于水层。另外,分子选殖(molecular cloning)常利用洋菜胶(agarose)来分离不同大小的DNA片段或用以纯化DNA。核酸定量可利用核酸会吸收260及280 nm波长的UV光,而且可与荧光染剂ethidium bromide (EtBr)键结,这些物理特性即一般定量DNA的的基本原理。此外亦可藉由UV光的吸收来评估DNA的纯度,若纯化DNA的量足够时,可用光谱分析法定量,当DNA量少或不纯时,才用EtBr键结方法。(注意:EtBr为致癌剂,操作时务必带手套,并禁止戴手套的手到处乱摸!)溶媒萃取法 1.仪器用具:(1).桌上型离心机(2).37℃恒温箱(3).排烟柜2.药......阅读全文

抗原的制备方法-2

表2-1 室温下由S1提高到S2时每升加固体硫酸铵的克数  0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242

抗原的制备-2

 2.核酸的分离纯化  从细胞中提取核酸后,仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。除去这些“杂质”的过程,也就是核酸提纯过程。在核酸的分离纯化时,为防止核酸大分子的变性降解,必须在0~4℃的低温条件下操作。核酸酶的水解作用,是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍,现普遍采用加入去污剂或加入E

核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

分子克隆常用技术

一、核酸的纯化  在分子克隆的所有操作中,最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质,通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时,可进行这种抽提。然而,如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸,则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后

核酸分离与纯化的设计与原则(二)

(四)核酸的浓缩、沉淀与洗涤随着核酸提取试剂的逐步加入,以及去除污染物过程中核酸分子不可避免的丢失,样品中核酸的浓度会逐渐下降,及至影响到后面的实验操作或不能满足后继研究与应用的需要时,需要对核酸进行浓缩。沉淀是核酸浓缩最常用的方法,其优点在于核酸沉淀后,可以很容易地改变溶解缓冲液和调整核酸溶液至所

核酸的纯化,浓缩和定量

一、核酸的纯化  在分子克隆的所有操作中,最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质,通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时,可进行这种抽提。然而,如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸,则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后

常用细胞凋亡检测方法(图)-2

细胞凋亡的图片5细胞凋亡的图片6细胞凋亡的研究方法一、定性和定量研究只定性的研究方法:常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察(普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜)进行定量或半定量的研究方法:各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。二、区分凋亡和坏死可将二

国家药监局印发食品安全检验机构技术装备等基本标准

关于印发餐饮服务食品安全检验机构技术装备基本标准和现场快速检测设备配备基本标准的通知 国食药监食[2011]130号 各省、自治区、直辖市及新疆生产建设兵团食品药品监督管理局:   为贯彻落实《食品安全法》、《食品安全法实施条例》以及《餐饮服务食品安全监督管理办法》,逐步建立

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化             实验材料 T4 DNA 连接

引物合成介绍(1)

1.引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。申能博彩公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高通量

体液样本核酸提取纯化

无细胞体液包括:血浆或血清,脑脊液 ,尿液,其他无细胞体液,细胞培养上清液。QIAamp Viral RNA Mini Kit —— 从无细胞体液中纯化病毒 RNA1)快速纯化高品质病毒 RNA(见图 1)2)无需有机提

国家药监局印发食品安全检验机构技术装备等基本标准

省级检验机构序号名称主要用途性能要求配置数量(台套)1电子天平食品检验用试剂、样品和标准品的称量感量(g):0.001,0.0001,0.0000132酸度计食品检验过程中pH值的测定精度:±0.01pH23冷冻离心机食品检验过程中营养成分或者污染物等的提取分离最高转速不小于16000rpm;温度设

全国生物医药色谱会分会报告集锦(一)

  2012年4月21日下午,全国生物医药色谱及相关技术学术交流会各分会在美丽的重庆大学虎溪校区陆续展开。以下是“生化与医药分会”的精彩内容,来自各著名高校、研究院所的专家、老师,就色谱新技术、新观念以及在药品、蛋白质、天然产物等分析、分离方面的应用进行了深入的交流。分

25 个引物相关的问题

1.      引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合

引物合成相关问题25答

  1. 引物是如何合成的?  目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和

别人家的实验室:植物园里的逆境生物学研究中心

  ——走进上海中科院植物逆境生物学研究中心   分析测试百科网讯 中国科学院上海植物逆境生物学研究中心坐落于风景优美的上海辰山植物园内,由中央“千人计划”顶尖人才、美国科学院院士朱健康教授领衔,是在中国科学院、上海市和国家有关部委联合支持下,依托中国科学院上海生命科学研究院研究平台,与上

25 个引物相关的问题

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北京200余仪器和检测企业研发项目通过鉴定

   近日,北京市科委公布了《关于公示2015年度第一批北京市企业研发项目鉴定结果的通知》,本次鉴定结果通过了7000多个项目,其中涉及分析仪器、方法及耗材的研发项目有200多个。200多个项目共涉及40多家单位,其中莱伯泰科、东西分析、北京普析通用、中科科仪、华测检测、利德曼、滨松光子、

FFPE样本核酸(DNA/RNA)制备

福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织切片的存档代表了珍贵且来源广泛的生物医学研究材料。随着越来越多的研究人员转向 FFPE 样品的分子分析,开发特定的操作步骤,考虑这些样品的独特性质就变得越来越重要。QIAGEN 在 FFPE 样本纯化及下游检测整个流程中都提供完善的解决方案。QIAamp

分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作

  【实验目的】   (1)了解实验的常规仪器、设备、耗材。   (2)掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。   【实验内容】   一、验室的常规仪器、设备   (一) 温度控制系统:   1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的

实验室设备常规仪器有哪些

实验室设备常规仪器有哪些(一) 温度控制系统:  1. 液氮罐:有些实验材料、某些器官组织、细胞株、菌株及纯化的样品等,要求速冻和长期保存在超低温环境下,就需要一个液氮罐(-196℃)具有经济、省力和较好地保持细胞生物学特性的优点。  2.低温冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要

分子生物学实验室的常规仪器设备

   (一) 温度控制系统:  1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的冰箱,最常使用的有:4℃、-20℃、-80℃冰箱。  4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。  -20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。  -80℃适合某些长

引物合成及各种问题总结

1.引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的

大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入实验

大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入             实验材料 大肠杆菌菌株 色

大肠杆菌中非天然氨基酸的整体掺入实验

氨基酸类似物的掺入越来越有用。非天然氨基酸的定点掺入,使得运用化学生物学对特定蛋白质的研究和应用成为可能。但是,非天然氨基酸的整体掺入也检验着蛋白质组和基因编码假定。例如,有机体对非天然氨基酸的适应可能会导致新的基因编码。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实

液相芯片技术的原理与应用进展

   液相芯片,也称为微球体悬浮芯片(suspension array,liquid chip),是基于xMAP(flexible Multi Analyte Profiling)技术的新型生物芯片技术平台,它是在不同荧光编码的微球上进行抗原 抗体、酶 底物、配体 受体的结合

液相芯片技术的原理与应用

液相芯片,也称为微球体悬浮芯片(suspension array,liquid chip),是基于xMAP(flexible MultiAnalyte Profiling)技术的新型生物芯片技术平台,它是在不同荧光编码的微球上进行抗原抗体、酶底物、配体

染色质免疫沉淀技术的应用

随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域,要想提供蛋白因子直接调控的证据,需要直接检测蛋白质-DNA的相互作用,而染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一种研

BECIA2017新产品奖大盘点:赛默飞、安捷伦、岛津位居三甲

  分析测试百科网讯 2017年10月10日-13日,国内分析测试行业影响力最大的展会——BCEIA2017在北京国家会议中心开幕,展出当今国内外分析测试领域的前沿技术和先进仪器设备。本次展会上,组委会颁布了BCEIA 2017新产品奖,共计22家国产仪器厂商、74个产品。其中获奖最多的厂商是赛默飞