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顺磁性链霉抗生物素蛋白珠子的纯化实验

试剂、试剂盒 ATEN 缓冲液聚乙烯乙二醇T5E5 缓冲液Dpn I蛋白酶 KRNA 酶 A5'端为生物素-TEG 且 3'端为核糖胞嘧啶的引物蛋白酶 K 处理过的 PCR 产物仪器、耗材 磁铁链霉抗生物素蛋白珠子实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂1X ATEN 缓冲液(见第 1 步)10X ATEN 缓冲液(见方案 1 的配方)聚乙烯乙二醇 (30%PEG,1.5mol/L 氯化钠)T5E5 缓冲液(见方案 1 的配方)2. 酶和酶缓冲液Dpn I蛋白酶 KRNA 酶 A3. 核酸和寡核苷酸5'端为生物素-TEG 且 3'端为核糖胞嘧啶的引物蛋白酶 K 处理过的 PCR 产物4. 专用设备磁铁链霉抗生物素蛋白珠子(强烈推荐使用 Genoviskm 公司的产品)二、方法1. 用 5'端为生物素-TEG 且 3'端为核糖胞嘧啶的引物扩增目标片段。PCR 后,按方案 1 所......阅读全文

交联染色质免疫共沉淀(X-ChIP)实验设计

ChIP是一种强大的确定蛋白或者组蛋白修饰在基因组上定位的实验方法。染色质被分离出来后采用抗体与抗原的结合来判定目的蛋白是否结合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白结合位点在全基因组范围的分布(微阵列或DNA序列)。这种方法具有空间性与时效性。该实验设计为如何在细胞中进行ChIP实验提供了详细的步骤

Cell背靠背 | 相分离促进紧密连接形成的机制

  细胞连接(cell junction) 是指相邻细胞之间、细胞与细胞外基质之间在质膜接触区域特化形成的连接结构。细胞连接在加强细胞间的机械联系,维持组织结构的完整性和协调不同细胞功能方面起着重要的作用。细胞连接可分为紧密连接(tight junction)、锚定连接和通讯连接三种类型。其中紧密连

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性实验材料微管                            

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性 通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性             实验材料

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验1

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性实验材料微管试剂、试剂盒聚赖氨酸溶液仪器、耗材盖玻片实验步骤1. 准备该显微检测所需的盖玻片:(1) 盖玻片在 200 μg/ml 聚赖氨酸溶液中室温过夜。(2) 玻片在盛有 15 ml 蒸馏水的培养皿中翻转洗涤 4 次,每次 10 分钟。(3) 洗

Cell;背靠背 | 相分离促进紧密连接形成的机制

  细胞连接(cell junction) 是指相邻细胞之间、细胞与细胞外基质之间在质膜接触区域特化形成的连接结构。细胞连接在加强细胞间的机械联系,维持组织结构的完整性和协调不同细胞功能方面起着重要的作用。细胞连接可分为紧密连接(tight junction)、锚定连接和通讯连接三种类型。其中紧密连

Cell;背靠背 | 相分离促进紧密连接形成的机制

  细胞连接(cell junction) 是指相邻细胞之间、细胞与细胞外基质之间在质膜接触区域特化形成的连接结构。细胞连接在加强细胞间的机械联系,维持组织结构的完整性和协调不同细胞功能方面起着重要的作用。细胞连接可分为紧密连接(tight junction)、锚定连接和通讯连接三种类型。其中紧密连

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

Western Blot详解(六)

GGG.我想尽量提高转膜的效率(我的实验要求转到膜上的蛋白越多越好,不管是什么大小蛋白)不知道有那些办法?解答:不管怎么转都会存在蛋白转移不完全(电压过小时间过短)或过度转移(电压过大时间过长)的问题,鱼(小分子量蛋白)和熊掌(大分子量蛋白)不可得兼呵呵。建议把胶切成两半,比如以35KD为界,分别进

Western Blot详解-常见的问题指南(四)

9. 条件的摸索DDD. 用的是Santa Cruz的抗体,也实验过一抗和二抗肯定能结合,二抗加DAB肯定能显色。电泳的胶用考马斯亮蓝染色没问题,但是不知道与Marker对应的条带是否是我要的(我目的蛋白的分子量分别是55KD、29KD)。半干法2小时转膜后,丽春红染色发现大分子量蛋白转过去的较少。

核糖克隆实验

试剂、试剂盒 ATEN 缓冲液DNA 缓冲液(TEN)KLA 缓冲液T5E5Dpn IKlentaq LA 蛋白酶 K蛋白酶K储存缓冲液 RNA 酶 A设计好的载体已经进行 5'端生物素-TEG 修饰并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修饰过的引物卡那霉素(Sigma)四

如何避免IP检测过程中的重链干扰与轻链干扰?

免疫沉淀 (Immunoprecipitation,IP) 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与ProteinA/G偶联的agarose或Sepharose珠子孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤

如何阅读基因载体图谱?(二)

二、选择和准备载体选择载体主要依据构建的目的,同时还要考虑载体中应有合适的限制酶切位点等。如果构建的目的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体。选用哪种载体,还是要结合目的基因及载体特点以实验目的为准绳。 载体选择主要考虑下述3点: 1、构建DNA重组体的目的,克隆扩增/表达表达,选择合适的

如何阅读基因载体图谱?

基因载体是基因工程的核心,也是基因治疗中强有力的生物工具,我们先来认识和阅读载体图谱吧。 载体分类及载体组成元件 载体分类 1、按属性分类:病毒载体和非病毒载体 病毒载体是一种常见的分子生物学工具,可将遗传物质带入细胞,原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞,进行感染的分子机制。

核糖克隆实验

这个方案只是用 RNA 酶处理 PCR 产物的一种方法。有很多可选择和有效的途径来纯化 PCR 产物以除去引物,接着用酶处理 PCR 产物,然后再除去酶。值得注意的是用 PCR仪设置温浴程序是很方便的。可以在加热步骤完成后选择加上“冷却”步骤,即在冷模块中放置 5 min 甚至过夜。本实验来源于 P

核糖克隆实验

试剂、试剂盒ATEN 缓冲液DNA 缓冲液(TEN)KLA 缓冲液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K储存缓冲液RNA 酶 A设计好的载体已经进行 5'端生物素-TEG 修饰并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修饰过的引物卡那霉素(Sigma)四环素Ticarci

随机RNA文库的SELEX筛选实验

实验方法原理 SELEX 技术是一种利用随机寡核苷酸(DNA 或 RNA)文库筛选靶分子的特异性配基的组合化学技术。最常用的是随机 RNA 文库,因为 RNA 分子中除 G-C、A-U 碱基对以外,还有 G-U 等变偶碱基对的存在,可以形成发夹、假结、凸环、G-四聚体等多种空间结 构,它

随机RNA文库的SELEX筛选实验

            实验方法原理 SELEX 技术是一种利用随机寡核苷酸(DNA 或 RNA)文库筛选靶分子的特异性配基的组合化学技术。最常用的是随机 RNA 文库,因为 RNA 分子中除 G-C、

核糖克隆实验

—、材料1. 缓冲液、溶液和试剂.10XATEN 缓冲液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92.5mol/L 氯化钠0.25mol/L Na4EDTA,pH7.9甜菜碱(SigmaB-2629)蓝色葡聚糖(bluedextran)(SigmaD

随机RNA文库的SELEX筛选实验

随机RNA文库的SELEX筛选实验可用于:(1)体外诊断;(2)体内治疗等。实验方法原理SELEX 技术是一种利用随机寡核苷酸(DNA 或 RNA)文库筛选靶分子的特异性配基的组合化学技术。最常用的是随机 RNA 文库,因为 RNA 分子中除 G-C、A-U 碱基对以外,还有 G-U 等变偶碱基对的

Fab片段抗体表达产物的纯化和鉴定

实验概要本实验介绍了三种抗体纯化的方法。实验步骤1. 抗Fab片段抗体亲和层析纯化法   1) 偶联抗人或抗鼠Fab片段抗体到Protein G Sepharose,将纯化的抗人或鼠Fab片段抗体以2mg/ml的比例与Protein G Sepharose凝胶珠溶液混合,

chromotek-GFP和RFP常见问题解答

1、GFP-Trap®可识别的GFP衍生物类型有哪些?(1) eGFP, wtGFP, GFP S65T(2) TagGFP(3) eYFP, YFP, Venus, Citrin(4) CFP不能识

免疫沉淀 (IP)

实验概要免疫沉淀是一种纯化蛋白质的方法。将我们感兴趣的一种蛋白质的抗体与细胞提取液孵育,以使抗体和蛋白质在溶液中结合。然后用protein  A/G 耦合的琼脂糖凝胶,从样品中将抗体/抗原复合物提取出来。这种物理方法可将所需蛋白质从样品中分离。然后样品可以通过SDS-PAGE  

方案4用于蛋白质组分析微毛细管色谱及ESI—体化装置制备

实验材料待研究的蛋白质样品试剂、试剂盒乙酸乙腈乙醇甲酸仪器、耗材自动进样机C18柱填料毛细管切割器衍生的硅树脂转向阀HPLC 系统质谱仪显微镜pH 试纸聚酰亚胺涂层的毛细管压力室丙烷喷灯超声波破碎仪压力调节器实验步骤一、微型毛细管层析柱的构建将一根聚酰亚胺毛细管的一端拉细至 5um 左右,其尖端可以

酵母遗传学方法实验指南——技术和方案5

技术和方案5 TAP纯化方法试剂、试剂盒NP-40缓冲液TEV C 缓冲溶液钙调蛋白结合缓冲液(CBB)钙调蛋白洗脱缓冲液(CEB)实验步骤1.培养 3~6L 细胞至浓度为 2X107~3X107 个/ml(OD50=1.0~1.3)。2.离心收集细胞,并用冰预冷的水洗一次。3.用冰预冷的 NP-4

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤 一、化学法和酶法细胞裂解 微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些

核糖体失活展示系统实验

核糖体失活展示系统             实验材料 RTA 基因

核糖体失活展示系统实验

实验材料RTA 基因试剂、试剂盒结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液仪器、耗材RNeasy™mini 试剂盒实验步骤这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。3.1 RIDS 表达载体的构建首先,需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子、RTA 和

高通量组织研磨机的特点与应用

高通量组织研磨器又称(多样品组织研磨器)是一种特殊的、快速的、高效率的、多试管的一致系统。它能将任何来源(包括土壤、植物和动物的组织/器官、细菌、酵母、真菌、孢子、古生物标本等)的原始DNA、RNA和蛋白质进行提取和纯化。 高通量组织研磨机应用范围:1.适用于各种植物组织包括根、茎、叶、花