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核糖克隆实验

这个方案只是用 RNA 酶处理 PCR 产物的一种方法。有很多可选择和有效的途径来纯化 PCR 产物以除去引物,接着用酶处理 PCR 产物,然后再除去酶。值得注意的是用 PCR仪设置温浴程序是很方便的。可以在加热步骤完成后选择加上“冷却”步骤,即在冷模块中放置 5 min 甚至过夜。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒ATEN 缓冲液DNA 缓冲液(TEN)KLA 缓冲液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K储存缓冲液RNA 酶 A设计好的载体已经进行 5'端生物素-TEG 修饰并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修饰过的引物卡那霉素(Sigma)四环素Ticarcillin仪器、耗材电转化仪器PCR(薄壁)试管管壁厚度规则的试管链霉抗生物素蛋白珠子实验步骤—、材料1. 缓冲液、溶液和试剂.10XATEN 缓冲液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92......阅读全文

RT-PCR实验方法大全

RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单

RT-PCR实验方法总结大全

生物谷: RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单改变

RT-PCR实验方法总结(1)

RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求: 1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA

RT-PCR实验方法总结大全

生物谷: RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存

用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图

核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针(核糖探针)杂交,然后未杂交的序列被一种或几种单链特异性的核糖核酸酶裂解。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理核糖核酸酶保护分析用于度量特

常用的分子生物学基本技术1

DNA重组技术(或基因工程)是20世纪生物学的伟大成就,并已渗透到生命科学包括医学 各个领域,为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用,着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分

用RNA的免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋...(一)

用RNA的免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验实验方法原理 RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。实验材料 载体酵母 tRNARQ1 DNA 酶糖原小牛肠碱性磷酸酶T4 DNA 连接酶JMJ09 感受态细菌试剂、试剂盒 PBSNET

核糖克隆实验

试剂、试剂盒 ATEN 缓冲液DNA 缓冲液(TEN)KLA 缓冲液T5E5Dpn IKlentaq LA 蛋白酶 K蛋白酶K储存缓冲液 RNA 酶 A设计好的载体已经进行 5'端生物素-TEG 修饰并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修饰过的引物卡那霉素(Sigma)四

核糖克隆实验

—、材料1. 缓冲液、溶液和试剂.10XATEN 缓冲液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92.5mol/L 氯化钠0.25mol/L Na4EDTA,pH7.9甜菜碱(SigmaB-2629)蓝色葡聚糖(bluedextran)(SigmaD

核糖克隆实验

试剂、试剂盒ATEN 缓冲液DNA 缓冲液(TEN)KLA 缓冲液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K储存缓冲液RNA 酶 A设计好的载体已经进行 5'端生物素-TEG 修饰并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修饰过的引物卡那霉素(Sigma)四环素Ticarci

李劲松/胡苹开发了1型强直性肌营养不良症的小鼠模型

  1型强直性肌营养不良症(DM1)的多系统表现可能是由于DMPK中CTG重复序列异常扩增引起的多个基因(包括DMPK,其邻近基因(SIX5或DMWD)和下游MBNL1)的剂量减少所致。 但是,缺乏直接的证据。  2029年12月18日,中国科学院上海生化细胞所李劲松及胡苹共同通讯在Cell Res

顺磁性链霉抗生物素蛋白珠子的纯化实验

试剂、试剂盒 ATEN 缓冲液聚乙烯乙二醇T5E5 缓冲液Dpn I蛋白酶 KRNA 酶 A5'端为生物素-TEG 且 3'端为核糖胞嘧啶的引物蛋白酶 K 处理过的 PCR 产物仪器、耗材 磁铁链霉抗生物素蛋白珠子实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂1X ATEN 缓冲液(见第

顺磁性链霉抗生物素蛋白珠子的纯化实验

            试剂、试剂盒 ATEN 缓冲液 聚乙烯乙二醇 T5E5 缓冲液 Dpn I 蛋白酶 K

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试剂、试剂盒ATEN 缓冲液聚乙烯乙二醇T5E5 缓冲液Dpn I蛋白酶 KRNA 酶 A5'端为生物素-TEG 且 3'端为核糖胞嘧啶的引物蛋白酶 K 处理过的 PCR 产物仪器、耗材磁铁链霉抗生物素蛋白珠子实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂1X ATEN 缓冲液(见第 1

Cell:听2015拉斯克奖得主讲诉他们的故事

  9月8日,美国拉斯克基金会公布了2015年拉斯克奖的获奖者。由于在过去的20年里有30多位拉斯克奖获得者成为了诺贝尔奖得主,因此它被视作是诺贝尔奖的风向标。同日,国际顶级学术期刊《细胞》(Cell)推出了一系列的文章来介绍拉斯克奖得主的开创性研究成果。在这些文章中,你可以读到关于这些获奖者的故事

动物RNA提取实验原理

RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关

肝脏细胞RNA的提取原理、材料和方法

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肝脏细胞RNA的提取操作方法

一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是

肝脏细胞RNA的提取

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一、核酸提取技术的改进进行分子生物学研究的前提是取得高数量和高质量的核酸,即DNA和RNA。由于隐球菌细胞壁外有一层厚厚的荚膜,为破除真菌细胞壁造成很大困难。可靠地提取隐球菌DNA的方法建立于20世纪80年代后期,研究者先后建立了玻璃珠方法、超声粉碎、液氮冷冻研磨等破壁技术。后来,发展酶学方法取代物

PCR实验技术(一)

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PCR实验技术

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端粒酶活性检测操作必知

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前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体,它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成,每一种 snRNP 由一个 snRNA 和几种蛋白质构成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋