同期Cell子刊发布三项中国学者新成果
最新一期（7月）Cell Stem Cell杂志公布了三项中国学者的最新成果，包括嵌合体灵长动物，TPO在大肠癌肝转移过程中的关键作用，以及“类精子细胞”的单倍体细胞系。 首先来自中科院生物化学与细胞生物学研究所的李劲松研究组发表了题为“CRISPR-Cas9-Mediated Genetic Screening in Mice with Haploid Embryonic Stem Cells Carrying a Guide RNA Library”的文章，建立了能稳定支持半克隆小鼠出生的“类精子细胞”单倍体细胞系，并证明这些细胞能携带CRISPR-Cas9文库一步产生大量携 带不同突变基因的小鼠。该成果填补了哺乳动物在个体水平上进行遗传筛选的空白，为遗传发育研究提供新的体系。 在这篇文章中，研究人员从H19-DMR敲除的小鼠精子中建立了单倍体细胞系（H19-DMR敲除后，H19的表达下降），发现将这些细胞......阅读全文
小鼠βactin基因的克隆表达（4）
实验步骤：（1）诱导靶蛋白表达分别挑取对照菌和重组菌1~2个菌落，接入5ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养过夜。取5ml过夜培养物接入500ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养2h以上，至对数中期（A550=0.5~1.0）。向诱导管中加入IPTG使其浓
小鼠βactin基因的克隆表达（3）
（2）质粒的提取及酶切鉴定分析 质粒的提取按照质粒提取试剂盒的操作步骤进行，然后进行双酶切鉴定。 管号 ① ② 质粒DNA
小鼠βactin基因的克隆表达（2）
实验步骤： （1）目的基因与表达载体的连接反应： ①表达载体和目的片段的酶切 管号 ① ② pGEX 4T-1
小鼠βactin基因的克隆表达（1）
动物组织RNA的提取实验目的：掌握由动物组织中提取总RNA的方法实验原理：Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA
30小鼠多克隆抗体制备服务
30小鼠多克隆抗体制备服务 多克隆抗体是由多个B淋巴细胞克隆所产生的,受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗体。北京百欧泰生物技术有限公司拥有专业的抗体研发生产团队，可为客户提供包含抗原设计—多肽合成、蛋白表达—动物免疫—抗体纯化—抗体标记—免疫学检测等项目的一站式抗体制备服务。根据客户具
从小鼠和人中克隆miRNA实验方法
Supplementary information to miRNAs cloned from mouse and humanAn online clearinghouse for miRNA gene name assignments (http://www.sanger.ac.uk/Softwa
Nature医学：“军功章”有小鼠的一半
许多关键性医学突破的背后都有一个成功的动物模型。科学家发现伊马替尼imatinib能够用于治疗罕见的高侵袭性淋巴瘤，就是一个很好的例子。该研究发表在最近一期的Nature Medicine杂志上。 间变性淋巴瘤ALCL是一种侵袭性非常高的淋巴瘤，患者通常是儿童和年轻人，这种疾病极难医治
冻干体细胞克隆小鼠可产生健康后代
日本科学家描述了一种新方法，可使用冷冻干燥体细胞克隆小鼠。该研究为遗传物质存储带来了进展。相关研究7月5日发表于《自然—通讯》。 整只动物克隆可用于保障生物多样性、挽救濒危物种。然而当下的生物样本储存方法依赖超低温存储，成本高昂而且易受断电故障等问题影响。近期进展使人们能够存储来自冻干精细胞的
简述克隆的早期研究
克隆一词是英文单词clone的音译，作为名词，clone通常被意译为无性繁殖系。同一克隆的所有成员的遗传构成是完全相同的，例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆，例如：同卵双胞胎实际上就是一种克隆。然而，天然的哺乳 动物克隆的发生率极低，成员数目太少（一般为两个），且
单克隆小鼠抗人上皮细胞膜抗原
上皮细胞膜抗原是上皮细胞表面大分子糖蛋白物质，它不仅存在于各种上皮，以及各种上皮来源的肿瘤，也可存在于部分非上皮及其来源的肿瘤，如浆细胞，组织细胞等。 应用EMA来检测正常的组织时，其阳性表达主要在细胞膜上，但在检测肿瘤时，这种阳性物不仅在细胞膜上出现，也可在细胞浆中见到。实验中发现，肿瘤细胞在分化
上海生科院等建立“类精子细胞”的单倍体细胞系
2012年，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所李劲松研究组与徐国良研究组合作从小鼠的精子中建立了孤雄单倍体胚胎干细胞，并证明这些细胞能够代替精子使卵母细胞“受精”产生半克隆小鼠，该项研究成果成功入选2012年中国科学十大进展。然而，单倍体细胞随着体外培养传代，特别是经过遗传编
制滴菌素A对小鼠克隆胚胎的染色体重建
实验概要体细胞移植胚胎制备完成后，若用制滴菌素A(TSA)处理一下，其胚胎制备效率会显著增加。本次试验中以小鼠早期SCNT胚胎为研究对象，检测了TSA在体细胞核重编程方面的影响；检测方面包括：染色体重排、组蛋白修饰、DNA复制和转录活性恢复。实验步骤1. 卵母细胞收集B6D2F1雌鼠注射5 IU马绒
葡萄糖在小鼠克隆胚胎发育中的作用
实验概要为了研究葡萄糖对克隆胚胎早期发育的影响，本实验检测了克隆胚胎与对照组胚胎中葡萄糖的代谢及相关代谢情况，也检测了线粒体的超微结构、分布和数量。实验步骤1. 克隆胚胎制备和胚胎培养卵母细胞在含有5.5mM葡萄糖的CZB培养液中培养。用含有5.5mM葡萄糖和2.5ug/ml 细胞松弛素B的HE
葡萄糖在小鼠克隆胚胎发育中的作用
实验步骤1. 克隆胚胎制备和胚胎培养卵母细胞在含有5.5mM葡萄糖的CZB培养液中培养。用含有5.5mM葡萄糖和2.5ug/ml 细胞松弛素B的HEPES-CZB液(HCZB)作为工作液，卵母细胞在此液中被去掉纺锤体-染色体复合体；用卵丘细胞作为核供体。用注射针反复吸入、吹出卵丘细胞，以除去
葡萄糖在小鼠克隆胚胎发育中的作用
实验步骤1. 克隆胚胎制备和胚胎培养卵母细胞在含有5.5mM葡萄糖的CZB培养液中培养。用含有5.5mM葡萄糖和2.5ug/ml 细胞松弛素B的HEPES-CZB液(HCZB)作为工作液，卵母细胞在此液中被去掉纺锤体-染色体复合体；用卵丘细胞作为核供体。用注射针反复吸入、吹出卵丘细胞，以除去其细
克隆技术研究现状
一、克隆的早期研究 克隆一词是英文单词clone的音译，作为名词，c1one通常被意译为无性繁殖系。同一克隆内所有成员的遗传构成是完全相同的，例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆，例如：同卵双胞胎实际上就是一种克隆。然而，天然的哺乳动物克隆的发生率极低，成员数
疯狂的小鼠视觉研究实验
近些年，神经科学的发展迅速，然而在大脑视觉系统研究中多数研究人员使用的都是小鼠模型，因为小鼠是夜行动物、他们使用鼻子和胡须作为导航，因此一些人担心对小鼠视觉研究实验可能毫无意义! Nature：疯狂的小鼠视觉研究实验 几十年以来，科学家们都在致力于大脑视觉系统的研究，旨在了解视觉信号如何被大脑皮层处
日本科学家成功实现对小鼠连续25代克隆
日本科学家在2008年克隆的小鼠 在一项新的研究中，日本理化学研究所发育生物学中心的研究人员对克隆多利羊(Dolly)所采用的技术进行了改进，培育出了具有正常寿命的健康克隆小鼠，并且利用该技术可对小鼠进行无限代次(generation)的克隆。 这项研究Teruhiko Wakayama
高效液相色谱(HPLC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体
从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。 一、原理 根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含mcabγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的
用高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体
实验概要本实验介绍了高效液相色谱(HPLC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体的原理及操作步骤。实验原理从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。根据离子
研究发现近半脑细胞新功能
据近日《自然·神经科学》杂志上的一篇论文，美国塔夫茨大学医学院的研究人员发现星形胶质细胞前所未知的新功能，其具有神经元一样的电活动，且可与神经元相互作用并改变神经元的功能。这为神经科学研究开辟了一个全新的方向，有朝一日可能会导致治疗从癫痫、阿尔茨海默病到创伤性脑损伤等多种疾病。 星形胶质细胞是
超半肥胖儿童血脂异常研究概要
“高血压是心血管最重要的危险因素，血压从115/75mmHg开始，随着血压的增高，心血管病的发生发现也随之增加。高血压易诱发冠心病、心衰、房颤等多种致死疾病，每年造成我国过早死亡人数高达200万，造成直接损失高达366亿元人民币。”近日，国家心血管病专家委员会主任委员高润霖指出，近年来儿
MD使用CloneSelect－Imager系统在半固体培养基中进行单克隆...
MD使用CloneSelect Imager系统在半固体培养基中进行单克隆验证生物药品审批的监管标准一直都在不断变化。其中用于细胞系单克隆来源的监管条例驱使我们要在生物药物开发过程中使用更有效的技术或方法。许多研究人员通常使用成像系统（如CloneSelect Imager）在液体培养基中验证单
同期Cell子刊发布三项中国学者新成果
最新一期（7月）Cell Stem Cell杂志公布了三项中国学者的最新成果，包括嵌合体灵长动物，TPO在大肠癌肝转移过程中的关键作用，以及“类精子细胞”的单倍体细胞系。 首先来自中科院生物化学与细胞生物学研究所的李劲松研究组发表了题为“CRISPR-Cas9-Mediated Genetic
GeneCopoeia基因克隆技术相关研究
与PCR、qPCR等技术一样，作为分子实验室必备手段，分子克隆技术被广泛用于多样的基因功能研究。所谓分子克隆指的是在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，使之进入宿主细胞内并获得持续稳定增殖能力和表达。 基因克隆技术的发展经历3个阶段，第一阶段为经典的T4 DNA连接酶介
李劲松课题组Cell－Stem－cell用CRISPR构建多重基因修饰小鼠
来自中科院上海生命科学研究院的研究人员报告称，他们找到了一种方法来提高利用小鼠孤雄单倍体胚胎干细胞系(AG-haESCs)生成半克隆小鼠的效率。并证实借助于CRISPR-Cas9技术可构建出多重遗传修饰的半克隆小鼠及实现对其的诱变遗传筛查。这些重要的研究结果发布在7月9日的《细胞干细胞》（Cel
免疫球蛋白纯化技术——纯化小鼠腹水中单克隆抗体
实验方法原理根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。实验材料PBS试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材层析柱高效液相色谱仪实验步骤1. 腹水10000 g离心10 min，除去细胞和杂质，在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使
新研究增强蠕虫小鼠线粒体功能
《自然》近日在线发表的一篇论文指出，一个提高烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）水平的新方法能够增强线粒体功能、延长蠕虫寿命、保护小鼠健康。 NAD+是线粒体能量产生过程中的一个关键分子，但其水平会随年龄增长而下降。研究显示，提高NAD+水平对代谢和寿命有诸多好处。 瑞士洛桑联邦理工学院的Joh
研究脑部机制的新型小鼠模型
美国犹他州立大学领衔的研究团队培养出一种新型遗传工程小鼠，该小鼠携带一个蛋白标记，在一定程度上改变了不同钙水平的荧光应答，这就为研究星形胶质细胞和小神经胶质细胞提供了新的途径。该研究成果于2014年8月14日发表在《神经元》（Neuron）杂志上。 炎症是多发性硬化、阿尔茨海默病等神经性疾病共
研究发现限制饮食延长小鼠寿命
科学家使用模拟人类早衰症（一种导致过早老化的疾病）的小鼠，发现限制饮食可以使小鼠的加速老化放缓，并防止DNA损伤。8月25日发表于《自然》的这些发现有助于人们进一步了解饮食限制的有益影响，而且可能帮助发现治疗衰老异常的方法。 一些特定的早衰症源于错误的DNA修复机制，这导致DNA持续受损，并加