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《细胞》:三效合一的新型基因表达调控技术

研究人员研制出一种分子开关,能够可逆控制哺乳动物基因的开启和关闭,控制基因的表达水平,将对生物学过程和疾病相关基因的研究的精确度提高到一个更高的水平。详细内容刊登于上周《Cell》。 作者对这项研究“允诺了很多,”明尼苏达大学Perry Hackett(未参与研究)说,“他们兑现了允诺。” 研究小组带头人、波士顿大学James J. Collins说,控制基因表达的三种传统技术都有局限性。遗传学技术使“敲除”变得不可逆,因此研究基因在发育过程不同时间点的功能变得很困难。利用小分子(如四环素)的方法不能完全阻断靶蛋白的表达。RNA干扰(RNAi),利用小RNA阻断mRNA功能的技术,只是部分阻断表达,而且经常阻断与靶基因序列相似的基因的表达。 Collins与其同事采用一种合成生物学方法,将这三种技术的主要元件整合为一个基因调控系统。尽管这三种方法单独使用时,只能部分阻断基因的表达,但整合后会将表达降低到可忽略不计的水平。 ......阅读全文

alnylam公司

  在RNAi新药开发领域,Alnylam Pharmaceuticals是备受关注的“明星公司”。2018年,该公司研发的Onpattro(patisiran)成为首款获得FDA批准的RNAi疗法。本周,FDA又提前批准了该公司的Givlaari(givosiran)上市,这是世界上第二款获得FD

全球各实验室如何进行RNAi实验?

对于那些之前在研究基因功能方面受到挫折的研究人员而言,体内RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术的出现就好像是救兵一般,令人欣喜。理论上体内RNAi能进行更加细致的敲除,从而研究人员能获得时间和空间调控的基因敲除效果。 但是这并不意味着体内RNAi是一件容易完成的实验,实际上

全球各实验室如何进行RNAi实验?

(3)病毒入侵者(Viral Invaders) 使用者:南阿拉巴马州立大学微生物学和免疫学教授Sailen Barik 项目:敲除编码呼吸融合病毒 (Respiratory Syncytial Virus,RSV) 功能亚基的基因,抑制病毒在小鼠体内繁殖 问题:在确保草案全面试实施的同时,用

三种常用基因功能验正方法

科研人员在分析项目的过程中,碰到这样的问题:通过各种手段(选择清除分析、比较基因组学分析、转录组分析)获得的行驶某种功能的某基因,如果进行实验的验正呢?一般分为:基因上调(基因转染法)、基因下调(基因干扰法)后看蛋白表达水平、细胞功能改变、在体动物模型中相关功能的变化等。1、 RNA 干扰

腺相关病毒AAV简介及应用

一、腺相关病毒简介腺相关病毒(Adreno-Associated Virus, AAV)是微小病毒科(Parvoviridae)家族的成员之一。这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在20~26nm之间,含有大小在4.7~6kb之间的线状单链DNA基因组。它的复制和增

3种常用基因功能验正方法简述

  科研人员在分析项目的过程中,碰到这样的问题:通过各种手段(选择清除分析、比较基因组学分析、转录组分析)获得的行驶某种功能的某基因,如果进行实验的验正呢?一般分为:基因上调(基因转染法)、基因下调(基因干扰法)后看蛋白表达水平、细胞功能改变、在体动物模型中相关功能的变化等。   相信大家也有

3种常用基因功能验正方法简述

  科研人员在分析项目的过程中,碰到这样的问题:通过各种手段(选择清除分析、比较基因组学分析、转录组分析)获得的行驶某种功能的某基因,如果进行实验的验正呢?一般分为:基因上调(基因转染法)、基因下调(基因干扰法)后看蛋白表达水平、细胞功能改变、在体动物模型中相关功能的变化等。   相信大家也有

RNAi治疗新进展: 有望治愈致命遗传病

一种siRNA分子(紫色和绿色部分)可能治疗遗传性肝脏疾病   RNA干扰(RNAi),基因沉默技术的一种,显示了疾病治疗的巨大潜力,但从来没有人能确切证实它对疾病治疗所能发挥的作用。但是现在RNAi已经逐渐获得了研究人员的一致好评。一项新的研究表明,该方法能够显著并安全地削弱导致一种罕见的肝脏疾

RNAi的作用机制及siRNA的合成方法

RNAi的作用机制及siRNA的合成方法RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strandedRNA, dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达,用特异性的抗体几乎检测不到靶向

RNA干扰(RNAi)实验原理与方法(3)

3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法,

RNAi的实验原理和操作实用技术(3)

3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法,

Nat Rev Genetics | 环状RNA的合成与功能

  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA),是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明,环状RNA具

RNAi干扰技术及应用进展研究(二)

1.2 RNAi的作用特点 (1)“共抑制”性。RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默机制,它的启动子相当活跃,外源基因可以转录,但不能正常积累mRNA;RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活,同时诱导与其同源的内源基因沉默。 (2) 高效性。试验证明双链RNA干扰m

从胚胎的角度研究肿瘤发生问题

  一直以来,科学家们在研究某个基因的功能时无非就只有两种方法,要么就是敲除这个基因,或者下调其表达量,要么就是提高其表达量。在20世纪90年代发现的RNA干扰技术又给科学家们提供了一条新的研究基因功能的途径,RNA干扰技术可以通过小RNA分子(small RNA molecule)与目标m

华人先锋《Nature Methods》利用CRISPRi绘制遗传互作图谱

  斯坦福大学亓磊(Lei Stanley Qi)教授早年毕业于清华大学,现任斯坦福大学生物工程学、化学和系统生物学系的助理教授,近年来他在CRISPR研究领域取得了一系列突破性进展,比如第一次采用CRISPR-Cas9系统的变种技术,改变了读取诱导多能干细胞(iPSCs)基因组的方式(由此入选了生

曹雪涛课题组:m6A介导的细胞代谢重编程抑制病毒感染

  病毒感染可以调节宿主细胞的代谢,从而影响病毒的存活或清除。RNA修饰,特别是最为常见的哺乳动物mRNA修饰---N6-甲基腺苷(m6A)---能够调节基因表达和病毒感染。比如,m6A甲基转移酶复合物组分METTL3/14限制寨卡病毒产生,而m6A去甲基酶ALKBH5和FTO增强这种病毒的产生。在

最新RNAi技术可媲美转基因小鼠模型

  基因编辑技术一直都是生命科学的热门研究领域,近来编辑领域出现了可与转基因小鼠技术相媲美的新RNAi干扰技术,该技术由洛克菲勒大学的研究人员研制出,在全基因组水平上首次对小鼠进行RNAi筛查研究,并在数月内发现了导致表皮肿瘤生长的基因,研究成果发表在《自然》期刊上。   RNAi技术筛查致病基因

RNAi的发现和起源

首次发现dsRNA能够导致基因沉默的线索来源于线虫Caenorhabditis elegans的研究。>1995年,康乃尔大学的Su Guo博士和>Kemphues在试图阻断秀丽新小杆线虫(C.  elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义

RNAi的作用机制及siRNA的合成方法(一)

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strandedRNA, dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达,用特异性的抗体几乎检测不到靶向基因所表达的蛋白质。因此,RNAi技术又

eLife:利用CRISPR-Cas9突变证实癌基因MELK其实并不致癌

  根据一项新的研究,一种被认为是癌细胞必需的蛋白,即母系胚胎亮氨酸拉链蛋白激酶(maternal embryonic leucine zipper kinase, MELK),可能实际上并不是如此必需的。来自美国冷泉港实验室(CSHL)的研究人员利用CRISPR-Cas9敲除MELK基因,结果发现

RNAi的研究进展(二)

三,RNAi的应用前景RNAi 技术中的相关问题主要涉及以下几点:(1) dsRNA 序列的选择dsRNA 主要选自已知的cDNA 的开放阅读框架(ORF) 中的基因区域。为防止mRNA 调控蛋白对RISC 与靶RNA 结合的干扰,应避免选择包括:1) 起始密码子下游或终止密码的50~100 核

2017年不能错过的长非编码RNA研究推荐

  2017年即将过去,这一年的非编码RNA研究取得了很多重磅级成果。与早先的主要是在不同类型的疾病(癌症)中大规模鉴定非编码RNA,今年的研究是对非编码RNA机制的更深入探索,给我们展现了作用方式更丰富多彩的非编码RNA世界。图片来源于网络  一 长非编码RNA(lncRNA)  长非编码RNA是

清华大学 中科院Nature子刊 CRISPRi多重基因条件性敲低平台

   CRISPR应用广泛,其中一种叫做CRISPRi的方法利用了无酶活性的Cas9 (dCas9)融合KRAB转录抑制结构域,CRISPRi不切割靶基因,而是在dCas9靶向转录起始位点(TSS)时降低靶基因的表达。利用测序来读取sgRNA的相对富集/或耗竭,这一技术也被应用于全基因组范围内调查基

2020年环状RNA高分文章怎么发?

  环状RNA作为最新发现的RNA分子,从诞生之日起就是光环加身,屡屡登上Science、Nature、Cell等高分期刊。近期发表的《2019研究前沿》中,“环状RNA作为癌症新的生物标志物”成为生物科学领域6个新兴前沿之一。2019年环状RNA共发表SCI论文885篇,较2018年增长约20%,

2020年环状RNA高分文章怎么发?

  环状RNA作为最新发现的RNA分子,从诞生之日起就是光环加身,屡屡登上Science、Nature、Cell等高分期刊。近期发表的《2019研究前沿》中,“环状RNA作为癌症新的生物标志物”成为生物科学领域6个新兴前沿之一。2019年环状RNA共发表SCI论文885篇,较2018年增长约20%,

Yeast基因文库的分类和选择

自1995 年成立以来,Dharmacon 提供各种用于批量研究基因功能的工具,支持最多从全基因组范围到信号通路、基因家族方面研究基因与疾病、表型、分子机理对应的关系。近年来随着高端酶标仪、高通量显微镜、自动化流式细胞仪、高内涵等设备的普及和技术更新,Dharmacon 文库在各个领域中

RNAi的应用(研究基因功能、信号传导通路和基因治疗)

研究基因功能的新工具已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达,制作多种表型,而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段,产生类似基因敲除的效应。线虫和果蝇的全部基因组序列已测试完毕,发现大量未知功能的新基因,RNAi将大大促进对这些新基因功能的研究。与传统的基因敲除技术

Yeast基因文库的分类和选择

文库种类Dharmacon酵母资源包括多个酵母基因组文库,包括ORF文库、基因敲除(Knock Out)菌株、蛋白质相互作用文库、突变菌株和各种筛选文库等。除此之外,Dharmacon 针对Saccharomyces cerevisiae 研究领域提供了Zoonome siRNA 文库。酵母

基因编辑那么热,可是你都会用了吗?

  基因编辑是一种遗传工程技术,针对某个序列已知但功能未知的序列,通过改变生物的遗传基因,使其特定的基因功能丧失作用,通过研究对生物体造成的影响,进而推测出该基因的生物学功能。本文为你科普基因编辑三大技术:  基因敲除  进行DNA水平编辑。一般用于构建基因敲除鼠模型。  CRISPR/Cas9:C

RNAi干扰技术及应用进展研究(三)

3.2 基因治疗及药物筛选探索由于RNAi是针对转录后阶段的基因沉默,相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除,整个流程设计更简便,且作用迅速,效果明显,为基因治疗开辟了新的途径。 其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制,控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达。尤其