慢性髓细胞性白血病的间期FISH研究实验
本章的目的是应用荧光原位杂交来研究慢性髓细胞性白血病(CML) 患者的间期核。根据我们的经验,FISH 用来检测 BCE/ABL 融合形成的所有形式的费城(Ph) 染色体 FISH 是常规细胞遗传学研究有价值的辅助手段并且能够应用于同样的标本。因为 FISH 可以用来对增殖的肿瘤细胞中期分裂相和非增殖的间期细胞进行定量研究,这对用外周血或骨髓来评价治疗效果特别有试剂、试剂盒DAPI乙醇甲酰胺冰乙酸杂交缓冲液甲醇Nonidet P40SSC仪器、耗材盖玻片BCR ABL 双色双融合探针实验步骤一、样品1.用经过培养的并且按照血液恶性肿瘤标准细胞遗传学程序收获的骨髓和外周血可以得到最好的结果。2.对于HSH研究来说,用新鲜制备的片子很重要。固定在甲醇和冰乙酸中的细胞储存于-7.0°C中,直到 FISH 研究需要时才滴片。3.外周血和骨髓涂片也可以用这种方法处理。4.在对每批患者样品研究中应该包括带有正常和异常细胞的pH染色体阳性的对......阅读全文
FISH和PRINS技术
一、荧光原位杂交(FISH) 是一种简单、敏感、而容易操作的方法,结果迅速,并能在同一标本上检测多个不同的基因,可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。 FISH技术是利用特异的DNA探针,标记了生物素,地高辛、或荧光素,对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交,并用荧光法显示。 FISH
FISH-技术基本实验
实验方法原理试剂、试剂盒70%乙醇SSC磷酸盐缓冲溶液(PBS)Hemo-De清理试剂蛋白酶溶液仪器、耗材水浴锅增湿器玻片实验步骤一、制备培养的中期细胞标本1.在一个独立小室里放置一个水浴锅和一台增湿器。湿度应大约50%,如果房间湿度计显示低于45%,则应使用加湿器。2.预热水浴锅至67℃±2℃,在
FISH-技术基本实验
基本方案 实验方法原理 试剂、试剂盒 70%乙醇 SSC
FISH-技术基本实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 70%乙醇SSC磷酸盐缓冲溶液(PBS)Hemo-De清理试剂蛋白酶溶液仪器、耗材 水浴锅增湿器玻片实验步骤 一、制备培养的中期细胞标本1.在一个独立小室里放置一个水浴锅和一台增湿器。湿度应大约50%,如果房间湿度计显示低于45%,则应使用加湿器。2.预热水浴锅至67℃±
FISH-protocols-for-Drosophila2
3. Methods 3.1 RNA Probe Preparation 1. Different strategies can be used to prepare template DNA for synthesizing antisense RNA probes by in v
Basic-Fluorescent-in-situ-Hybridization-(FISH)
实验概要 Fluorescence in situ hybridization method is a kind of physical map drawing method, use fluorescent element mark probe, to detect probe and s
RNA-FISH-on-cultured-cells-in-interphase
IntroductionFluorescence in situ hybridization (FISH) has become a widely used method in genome and molecular genetic studies. The technique is highly
FISH-protocols-for-Drosophila1
.1 RNA Probe Preparation (see Note 1)1. 1.5 mL microcentrifuge tubes or standard 96-well V-bottom microplates.2. RNAse free water.3. T7, T3 or S
原位杂交(含FISH)
原位杂交组织化学常用试剂及处理 一、杂交前准备 (一)DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中,所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是:取市售
FISH和PRINS技术比较
一、荧光原位杂交(FISH)是一种简单、敏感、而容易操作的方法,结果迅速,并能在同一标本上检测多个不同的基因,可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。FISH技术是利用特异的DNA探针,标记了生物素,地高辛、或荧光素,对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交,并用荧光法显示。FISH实验步骤
FISH-荧光原位杂交实验
实验概要1. 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和实验技术 2. 掌握原位杂交技术的操作方法及荧光显微镜的使用方法 3. 了解其在生物学、医学领域的应用实验原理荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一门新兴的分子细胞遗传学技术,是20
临床诊断中的FISH检测
FISH(即荧光原位杂交)技术作为分子诊断的重要工具,在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。FISH检测是利用荧光基团标记DNA探针,再将标记的DNA探针与样本DNA进行原位杂交,最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数,以此作为诊断的依据。FISH的操作简便快捷,结果直观准确,因此FISH成了许多疾病
临床诊断中的FISH检测
FISH(即荧光原位杂交)技术作为分子诊断的重要工具,在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。FISH检测是利用荧光基团标记DNA探针,再将标记的DNA探针与样本DNA进行原位杂交,最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数,以此作为诊断的依据。FISH的操作简便快捷,结果直观准确,因此FISH成了许多疾病
FISH-is-not-a-fish荧光原位杂交中手动阅片和自动阅片大比拼
FISH是什么? 是一条条欢快的鱼儿吗? 红色、绿色、蓝色、黄色的亮点 是鱼儿身上的五彩斑斓吗? 我们这期讲得FISH可不是彩色的鱼儿 Q 那么,FISH到底是什么呢? FISH是荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridiza
FISH-is-not-a-fish荧光原位杂交中手动阅片和自动阅片大比拼
FISH是什么 FISH是什么? 是一条条欢快的鱼儿吗? 红色、绿色、蓝色、黄色的亮点 是鱼儿身上的五彩斑斓吗? 我们这期讲得FISH可不是彩色的鱼儿 Q 那么,FISH到底是什么呢? FISH是荧光原位杂交(Fluorescence In S
JCI:应用FISH技术检测肿瘤microRNA
霍华德•休斯医学研究所(HHMI)的研究人员通过微调荧光探针的设计以及RNA固定技术,开发出一种检测和定量肿瘤活检样本中microRNA分子的方法。这种新的荧光原位杂交(FISH)技术实现了肿瘤类型的鉴定。《The Journal of Clinical Investigation》杂志近日
RNA-FISH-on-cultured-cells-in-interphase2
Post-labeling DNA processing and purificationQiagen PCR clean up to get rid of unused oligonucleotides;Add 20µl cot1DNA, 10µl ssDNA to compete for rep
FISH荧光原位杂交技术简介
FISH荧光原位杂交技术:1969年,Gall和Pardue等首次将同位素探针用于原位杂交实验,获得成功。1987年,染色体原位抑制杂交法的创建,使FISH技术得以迅速发展。随后,Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素等非放射性物质标记探针,创立了双色FISH荧光原位杂交技术 。1990年,
FISH荧光原位杂交实验
实验概要通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和在生物学、医学领域的应用。掌握原位杂交技术的操作方法,熟练掌握荧光显微镜的使用方法。实验原理荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一门新兴的分子细胞遗传学技术,是20世纪80年代末期在原
FISH荧光原位杂交技术简介
FISH荧光原位杂交技术:1969年,Gall和Pardue等首次将同位素探针用于原位杂交实验,获得成功。1987年,染色体原位抑制杂交法的创建,使FISH技术得以迅速发展。随后,Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素等非放射性物质标记探针,创立了双色FISH荧光原位杂交技术 。1990年,Ne
FISH-基本技术和问题解决
试剂、试剂盒 Carnoy 固定液乙醇细胞悬液2 X SSC预热的胃蛋白酶工作液磷酸盐缓冲溶液变性液杂交后洗脱液DAPI 复染液仪器、耗材 水浴锅增湿器塑料保鲜膜湿度计试管架无尘纸相差显微镜干燥箱DNA探针镊子杂交湿盒温箱实验步骤 一、制备培养的中期细胞标本1.在一个独立小室里放置一个水浴锅和一台增
临床FISH:为疾病治疗带来新视角
病理学家是形态学的支持者。对他们来说,组织切片上的点点颜色能帮助你区分良性和病变的组织,为治疗提供线索。当然,关键词是“染色”。组织切片在光学显微镜下是没有特征的,因此病理学家(研究人员)必须染色,才能看见细胞。 在许多情况下,苏木精和曙红(H&E)染色就足够了,这揭示了基本的组织结构。不过,
FISH-基本技术和问题解决
试剂、试剂盒 Carnoy 固定液 乙醇 细胞悬液 2 X SSC 预热的胃蛋白酶工作液 磷酸盐缓冲溶液 变性液
荧光原位杂交(Fluorescence-in-situ-hybridization,FISH)
实验原理荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)是一门新兴的分子细胞遗传学技术,是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病
FISH-基本技术和问题解决
荧光原位杂交(FISH) 技术可以对染色体、细胞和组织中的特异核酸序列进行检测。明确检测到全染色体或染色体某个特定区域的结构或拷贝数发生改变是人类疾病重要的预兆因子。应用于染色体分析的 FISH 可以分为中期 FISH 和间期 FISH,两者的主要区别在预处理和杂交前的细胞制备工作。用于中期分析的细
荧光原位杂交(FISH)探针的制备
实验概要本实验介绍了荧光原位杂交(FISH)探针的制备原理及技术。实验原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合,这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。其基础是Southern blot原理,以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针,探针和
Multicolour-3DFISH-in-vertebrate-cells1
Introduction Multicolour 3D-FISH in combination with confocal microscopy, 3D image reconstruction and quantitative image analysis is an efficient to
Multicolour-3DFISH-in-vertebrate-cells4
Detection The choice of the detection scheme depends on several factors: (i) the number of haptens and fluorochromes used for probe labeling; (ii) t
Multicolour-3DFISH-in-vertebrate-cells5
Author Notes After the fourth round of DOP amplification the probe quality is considerably reduced. Use the low stringency cycles only in case
Multicolour-3DFISH-in-vertebrate-cells2
Small DNA-probes from cosmids or plasmids clonesThese kind of probes, especially plasmids, have become out of fashion for 3D-FISH due to their delicat