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小鼠肝细胞培养实验——细胞培养技术

实验方法原理直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步,是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同分为组织块培养法和单层细胞培养法。实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEMDMEM胰酶PBS仪器、耗材饭盒纱布小剪子小镊子大镊子大烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6 孔培养板吸管移液管手套微量加样器实验步骤一、实验步骤1. 将小鼠断颈致死,置 75%酒精泡2-3 秒钟,取肝脏,置于盛有 PBS 的平皿中。 2. 剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物,转移到另一个盛有 PBS 液的平皿中。 3. 用手术剪将脏器剪成小块(大小约 1mm2),玻片研磨,转到离心管,离心(1000 rpm,5 min)。 4. 视组织或细胞量加额加入5-6 倍(3-5 ml)胰酶,37℃中消化 20 分钟,每隔 5 分钟振荡一次,或用吸 管吹打一次,使细胞分离。&n......阅读全文

中国科学家设计出“新型生物人工肝系统”

  从中科院上海生科院生物化学与细胞生物学研究所获悉,该所惠利健研究团队与南京大学附属鼓楼医院丁义涛团队等成功设计出全新的基于“hiHep细胞”的生物人工肝系统,可显着提升肝衰竭猪的存活率,并有望延续肝衰竭患者的生命。相关成果已于1月16日发表在国际著名学术期刊《细胞研究》。  年初,该团队已经展开

个别组织细胞的培养

体内组织细胞在体外培养时,所需培养环境基本相似,但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同,各自要求条件有一定差别,所采取的培养技术措施亦不尽相同,现介绍个别组织细胞培养的要点如下:一、上皮细胞培养上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别

细胞培养的概念、原理、一般过程和无菌环境-1

现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,特别是在医药领域的发展,细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体;细胞工程中更

三维细胞培养技术及其相关载体的研究进展及应用(二)

2.3 人工合成高分子材料人工合成高分子材料可以通过分子设计等手段精确的控制其性质,也可以通过化工生产得到大批量性质基本相同的产品。相对于天然材料,更利于进行标准化的生产,力学强度也较好,但是生物相容性还有待提高,目前比较常用的办法是通过表面修饰在材料表面引入生物活性因子。合成高分子材料包括聚乳酸(

中科院两科学家携手推进“生物人工肝”产业化

  中科院上海生物化学与细胞生物学研究所惠利健研究员团队与多家单位科学家合作,突破“类肝细胞”体外培养技术,成功研制出生物人工肝系统。如今,获得该技术全球独家使用许可的上海微知卓生物科技有限公司在上海嘉定建成了国内首条人源性生物人工肝临床研发生产线。  据悉,该生产线将于下月投入运行,预计年产量可达

组织学研究方法

(一)一般光学显微镜术应用一般光学显微镜(简称光镜)观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块,先用固定剂(fixative)固定(fixation),使组织中的蛋白质迅速凝固,防止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等,一般常将几种固定剂配制成混

原代细胞分离与培养,你都掌握了吗?

  对于大部分科研人员来说,研究中一般用到均是现成的细胞系/株,我们只需要:进行细胞传代和保种。然而,这些细胞系常常由于体外长期培养,而丢失原有生物学特性,对药物处理的反应差距越来越大。因此,原代细胞的地位日渐凸显,Paper中若有了原代细胞的数据都会添色不少。然而,就小编亲生经历,原代细胞分离着实

Cell Stem Cell八大热点文章(12月)

  《Cell Stem Cell》杂志是2007年Cell出版社新增两名新成员之一(另外一个杂志是Cell Host & Microbe),这一杂志内容涵盖了从最基本的细胞和发育机制到医疗软件临床应用等整个干细胞生物学研究内容。这一杂志特别关注胚胎干细胞、组织特异性和癌症干细胞的最新成果。

肺细胞再生研究最新进展

  就像所有器官那样,人肺部刚开始时是作为未分化的干细胞团块存在的。但是在几个月后,这些细胞形成有序的结构。它们聚集在一起,一些细胞形成肺部气道,其他的细胞形成肺泡。肺泡是我们的人体交换氧气和二氧化碳的地方。在理想的情形下,最终的结果是形成两个健康的会呼吸的肺部。   近年来,自从科学家们首次发现

细胞系错误鉴定:终结的开始

  2010年5月ATCC SDO(Standards Development Organization)工作组在Nature review cancer杂志上发表了题为《Cell line misidentification:the beginning of the end》前瞻性报道。以下是全文

国内外实验动物模型概览

  生命是“能够自我营养并独立生长和衰败的力量”,这是亚里士多德(Aristotle,公元前384—322)通过动物、植物的研究对生命的哲学概括。动物也成为古代先哲们探索生命奥秘的主要对象之一,盖伦(Galen,公元130—200)开创了动物解剖学和实验生理学,他将来源于动物的知识推广到对人体的认识

2016年疾病模型研究进展

  疾病模型,作为各种疾病的替代物,在研究疾病发生发展的过程及机制、药物筛选及开发、药物药效及作用机制等过程中发挥着至关重要的作用。而建立和人类疾病状态相当的疾病膜型并不容易,各种模式动物在基因水平、生活习惯、体内微生物组成等方面都与人类有着相当大的差别,而疾病模型与真实疾病接近程度决定了我们的疾病

cccDNA:慢性乙肝持续感染的元凶

  慢性乙型病毒性肝炎影响着全球超过 2.5 亿人口,每年约有 65 万人死于 HBV 相关终末期肝病。共价闭合环状(ccc)DNA 是慢性乙肝持续感染的元凶,作为病毒复制的中介,其在宿主肝细胞核内以微染色体的形式存在,目前的治疗手段难以将其彻底清除,从而达到慢性乙肝的彻底治愈。  Gut 杂志上发

江苏大学 检验医学专业实验-临床免疫学检验

  抗血清的制备  【原理】:用抗原刺激机体可以产生抗体,抗原的性质、纯度和活性影响其免疫动物后获得的抗体的的特异性和效价。在体外有目的的制备抗原,经初次、再次免疫的过程可以获得高质量的抗体。  【注意事项】  ①制备佐剂时,一定要顺着同一方向用劲磨。  ②检查油包水的方法:培养皿内加水,滴入混匀液

中国科技大学Hepatology发表免疫新成果

  来自中国科技大学生命科学学院的研究人员在小鼠实验中证实,在急性病毒性肝炎中TIGIT调控了NK细胞激活。相关研究论文已被在国际著名肝脏疾病杂志Hepatology(最新影响因子12.003)接受并在线发布。   中国科技大学的田志刚(Zhigang Tian)教授和孙汭( Rui Sun)

细胞重新编程 挖出皮肤愈合“超能力”

《超人》里有个经常被效仿的经典情节,超人伪装成凡人克拉克·肯特,在被火烧到后,烧伤的伤口会瞬间愈合,险些让他的朋友识破他就是超人。 划了个小创口,皮肤愈合稀松平常,但如果创口过大,瞬间修复就成为超能力。近日,《自然》发表了美国等国科学家的一项研究,挖掘出皮肤愈合的“超能力”:通过病毒载体,

常用的分子生物学基本技术2

IS PCR的技术特点 (1)既具有PCR的特异性与高灵敏性,又具有原位杂交的定位准确性;(2)测到低于2个拷贝量的细胞内特定DNA序列,甚至可检测出单一细胞中的仅含一个拷贝的原病毒DNA;(3)有助于细胞内特定核酸序列定位与其形态学变化的结合分析;(4)可用于正常或恶性细胞,感染或非感染细胞的鉴定

单细胞精度解析人类T淋巴细胞起源及胸腺器官发生

  T淋巴细胞是宿主适应性免疫系统中最重要的免疫细胞之一,在抵抗病原入侵、维持机体稳态以及抗肿瘤等方面起到不可或缺的作用【1,2】。胸腺是T淋巴细胞发育的必需场所【3】。胎肝或骨髓来源的胸腺定植祖细胞(thymus seeding progenitor, TSP)迁移定植到胸腺后,即为早期胸腺祖细胞

Sartorius & Science Prize亚军研究:构建更好的胆管

在肝脏内,胆管以管道网络形式分布,可将肝脏分泌的胆汁输送到肠道。在胆道疾病中,胆汁运输障碍会导致肝脏内毒性胆汁淤积、肝脏损伤及永久性瘢痕 (肝硬化),最终只能通过肝移植来治疗。实际上,胆道疾病(胆管病)是导致儿童肝移植的首要病因(70%),占成人肝移植病因的三分之一。虽然此类疾病影响巨大,但我们

知识分享:维真腺病毒系统产品手册

  产品说明书   本产品仅限用于研究,严禁用于疾病诊断。   本产品仅供购买方内部研究使用,未经Vigenebio公司书面许可,严禁转售。   产品有限责任担保   Vigenebio保证您收到的产品符合产品目录上的规格。本担保规定了Vigenebio更换产品的责任。Vigenebio不提

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

不容错过!2019年8月Nature子刊重磅研究一览!

  本文中小编为大家盘点了2019年8月Nature子刊的亮点研究,分享给大家一起学习进步,希望读者朋友们喜欢。  【1】Nat Commun:重复精液暴露促进宿主对HIV感染产生抵抗力,只是谁敢尝试呢?  DOI:10.1038/s41467-019-11814-5  长期以来,人们认为精液仅能作

中国科技大学Hepatology探讨肝脏再生机制

  来自中国科技大学生命科学学院的研究人员在新研究中证实,共抑制受体TIGIT通过调控NK细胞与肝细胞之间的串扰保护了肝脏再生。这项研究已被在国际著名肝脏疾病杂志Hepatology(最新影响因子12.003)接受并在线发布。  中国科技大学的田志刚(Zhigang Tian)教授和孙汭( Rui

单细胞测序技术应用于发育生物学研究登顶三大学术杂志

  2019年即将结束,在这一年中,单细胞测序的火热充分展示了该技术在科学研究领域的重要。发育生物学作为生命基本过程研究的基础学科,单细胞测序技术是该领域研究突飞猛进的助推器。在这300多个日夜里,科学研究成果殿堂《Cell》、《Nature》、《Science》上有哪些发育生物学的成果跟单细胞技术

单细胞测序技术应用于发育生物学研究登顶三大学术杂志

  2019年即将结束,在这一年中,单细胞测序的火热充分展示了该技术在科学研究领域的重要。发育生物学作为生命基本过程研究的基础学科,单细胞测序技术是该领域研究突飞猛进的助推器。在这300多个日夜里,科学研究成果殿堂《Cell》、《Nature》、《Science》上有哪些发育生物学的成果跟单细胞技术

细胞和细胞内含物的观察-1

细胞质内含有多种细胞器。有些细胞器如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体等普遍存在于各种细胞中,而另有些细胞器如叶绿体,只存在于植物细胞中。细胞质内的这些结构,除叶绿体外,一般在光学显微镜下不易看见,必须经过一定的固定染色方法处理后,才能看到大多数细胞器,或直接用相差显微镜观察。线粒体线粒体是一种动态的

2017年5月Cell期刊不得不看的亮点研究

  5月份即将结束了,5月份Cell期刊又有哪些亮点研究值得学习呢?小编对此进行了整理,与各位分享。  1.Cell:皮肤中的调节性T细胞促进毛发再生  doi:10.1016/j.cell.2017.05.002  在一项新的研究中,来自美国加州大学旧金山分校的研究人员通过开展小鼠实验发现作为一类

克隆技术(十二)

应用前景奇妙的克隆克隆技术已展示出广阔的应用前景,概括起来大致有以下四个方面:(1)培育优良畜种和生产实验动物;(2)生产转基因动物;(3)生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法;(4)复制濒危的动物物种,保存和传播动物物种资源。以下就生产转基因动物和胚胎干细胞作简要说明。克隆山羊转基因动物研究是动

基因技术专题-2

RNAi技术RNA干扰(RNA interference, RNAi)是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应

迎难而上,类器官的血管化研究的破茧之路

类器官(Organoids)是将具有干性潜能的细胞在体外进行3D培养,形成多种特异性细胞类型集合的微器官团,能够体外再现真实器官的三维构造及生理功能。然而体外培养的类器官往往缺乏有效的血管,随着类器官体积的增加,缺氧及代谢废物累积导致细胞凋亡,最终致使组织坏死,因此目前培养的类器官无论是形态大小还是