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实验材料线粒体悬液试剂、试剂盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA仪器、耗材Bockman SW28 号转头实验步骤1. 在用于 Bockman SW28 号转头（或与其等同的产品）的 Uitradear 离心管中，小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一层 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液，形成 30 ml 的梯度：1.0 mol/L 蔗糖和 1.5 mol/L 蔗糖溶液中含：10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.5)1 mmol/L EDTA，pH 7.52. 小心加入线粒体悬液（总体积 7 ml），60000 g（22000 r/min）离心 20 分钟。线粒体会在 1 mol/L 和 1.5 mol/L 界面处形成一薄层。3. 移去样品层及其与 1.0 mol/L 层的交界。4. 用一巴斯德吸管轻柔的在 1.5 mol/L 层顶部吸出线粒体。5. 稀释蔗糖溶液，17000 g 离心 ......阅读全文
在实验过程中，由于样品的各种性质差异，只有选择了正确的离心方法，才能获得预期的分离纯化结果。常用的离心方法主要有差速离心法、密度梯度离心法。其中密度梯度离心法又可细分为速率区带离心和等密度梯度离心法。小贝离心学堂将对这三种常用的离心分离方法分别进行专题介绍。 离心方法——差速离心 &nb
*章离心机及转子的分类：一．离心机的分类：国际上对离心机的分类方法有三种：按用途分、按转速分和按结构分。按用途分类：分为制备型离心机和制备分析离心机。制备型离心机：仅供分离浓缩，提纯试样的离心机。制备分析离心机：不但能分离浓缩、提纯试样，而且可以通过光学系统对试样的沉降过程进行观察、拍照、测量、数字
一）简介：用简易的差分离心结合各种型式的密度梯度离心可以分离和纯化各种亚细胞器。研究者也可以根据自己的设备情况对实验参数做一定的改动，也可以更多地利用速率-区带密度梯度离心或等密度离心来简化实验过程和提高分离纯度。二）实验：ⅰ）匀浆制备： 鼠肝12克加入0.25M蔗糖与5mM Tris-H
离心技术的类型最大速度方法 (1)移动界面超速离心法 含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时，每种颗粒都达到其最大沉降速度，这时样品开始分离。离心管的上层逐渐形成透明的上清液，并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面，界面的移动相对于每种组分来说是特征的。虽然利用这种方法不一定能实现组分的纯化分离，
离心技术的类型 最大速度方法 (1)移动界面超速离心法 含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时，每种颗粒都达到其最大沉降速度，这时样品开始分离。离心管的上层逐渐形成透明的上清液，并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面，界面的移动相对于每种组分来说是特征的。 虽然利用
离心技术的类型 最大速度方法 (1)移动界面超速离心法 含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时，每种颗粒都达到其最大沉降速度，这时样品开始分离。离心管的上层逐渐形成透明的上清液，并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面，界面的移动相对于每种组分来说是特征的。 虽然利用
最大速度方法(1)移动界面超速离心法含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时，每种颗粒都达到其最大沉降速度，这时样品开始分离。离心管的上层逐渐形成透明的上清液，并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面，界面的移动相对于每种组分来说是特征的。虽然利用这种方法不一定能实现组分的纯化分离，但可以通过监测界面
一、破碎细胞的方法 1.杆状玻璃匀浆器法 •该匀浆器由一根端部表面磨砂的玻璃杆和一个内壁磨砂的玻璃套管组成。使用时，先用锋利的刀片把组织块切碎，然后把碎块加入套管中，用力使玻杆移动使组织细胞破碎。 2.高速组织捣碎机法 •使用时将4℃预冷的组织碎块或细胞悬液加入捣碎机的梅
实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
实验材料黄化苗 &n
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
实验材料黄化苗试剂、试剂盒匀浆缓冲液清洗缓冲液Percoll 梯度溶液仪器、耗材分光光度计实验步骤在选好植物材料和匀浆缓冲液后，接下来关键的因素包括匀浆方法、缓冲液的 pH、使用的缓冲液与植物组织之间的比例、研磨时间及温度等（见注释 5) 。3.1 匀浆根据植物组织的不同可以采取不同的匀浆方法，或者
抗血清的制备 【原理】：用抗原刺激机体可以产生抗体，抗原的性质、纯度和活性影响其免疫动物后获得的抗体的的特异性和效价。在体外有目的的制备抗原，经初次、再次免疫的过程可以获得高质量的抗体。 【注意事项】 ①制备佐剂时，一定要顺着同一方向用劲磨。 ②检查油包水的方法：培养皿内加水，滴入混匀液
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类
用体外或体内试验对机体的各种参与免疫应答的细胞进行鉴定、计数和功能测定，藉以了解机体的免疫状态，并对某些临床疾病的诊断，预后及疗效观察等也具有一定意义。一、免疫细胞的分离体外测定免疫细胞首先要从外周血或淋巴组织中分离所需的细胞。其主要方法是根据细胞的表面标记、理化性状及功能等方面的差别进行设计。
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被
蛋白质组学研究已经成为后基因组时代的研究热点，是生命科学研究领域又一个新的突破口。本文从对疏水性强的蛋白质、极性蛋白质、高丰度蛋白的处理、低丰度蛋白的富集和对样品溶液中干扰性物质的去除以及对不同染色后质谱前处理等方面综述了蛋白质样品的一般处理方法。 1. 不溶性蛋白质的处理 天然状态的蛋白质
现代生物学研究常常需要提取和纯化细胞及组织中的亚细胞构造（细胞核、质膜、内笪纲、高尔基体、线粒体、溶酶体、微粒体等等）。在经过选择的最合适的生物体匀浆制备后，用离心法提取和纯化亚细胞构造是最常用、也是最有效的实验手段。 （一）匀浆制备： 将生物体组织剪切成2~3毫米小块或小片，以每100毫升加湿重