细胞培养实验——贴壁细胞培养

实验材料冻存细胞试剂、试剂盒70% 乙醇PBS胰酶/EDTA仪器、耗材25 cm2 和 150 cm2 组织培养瓶CO2 培养箱实验步骤1. 将含有冻存细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒,打开安瓿,用吸管将细胞转移到含有 5 ml 起始培养基的 25 cm2 组织培养瓶中,轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,将其放入 5% CO2 加湿培养箱中 37℃ 培养过夜。3. 吸出起始培养基,换成适当的维持培养基。将细胞放回 CO2 培养箱 37℃ 培养,每天检查细胞是否生长至汇片。4. 如果细胞生长至汇片,吸出培养基。5. 用 PBS 或胰酶/EDTA 清洗细胞,除去细胞上残留的血清,将洗液吸出。6. 用 37℃ 、适当体积的胰酶/EDTA 刚好覆盖单层细胞(如对于 25 cm2 培养瓶需要 0.3 ml)。消化 30~40 s(细胞应该分开),......阅读全文

细胞培养实验——贴壁细胞培养

实验材料冻存细胞试剂、试剂盒70% 乙醇PBS胰酶/EDTA仪器、耗材25 cm2 和 150 cm2 组织培养瓶CO2 培养箱实验步骤1. 将含有冻存细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒,打开安瓿,用吸管将细胞转移到含有 5 ml 起始培养基的 25 cm

细胞培养贴壁培养的优点

●容易更换培养液;细胞紧密黏附于固相表面,可直接倾去旧培养液,清洗后直接加入新培养液。●容易采用灌注培养,从而达到提高细胞密度的目的;因细胞固定表面,不需过滤系统。●当细胞贴壁于生长基质时,很多细胞将更有效的表达一种产品。●同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例。●适用于所有类型细胞。3. 贴壁培养

细胞培养贴壁培养的基本特性

贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养(瓶)器皿壁上,细胞一经贴壁就迅速铺展,然后开始有丝分裂,并很快进入对数生长期。一般数天后就铺满培养表面,并形成致密的细胞单层。

细胞培养实验——悬浮细胞培养

实验材料冻存 HeLa S3 细胞试剂、试剂盒70% 乙醇完全 MEM-10胰酶/EDTA仪器、耗材旋转瓶完全培养基-525 cm2 组织培养瓶C02 培养箱Sorvall H-6000A 转子100 ml 或 200 ml 通气旋转瓶和带滤膜的瓶盖实验步骤1. 将含有冻存 HeLa S3 细胞的安

细胞培养中的不贴壁解决办法

细胞培养中的不贴壁及分化的解决办法  如果细胞呈现不贴壁现象,且细胞根本就不能锚定的解决办法:1、可以在铺有琼脂和琼脂糖的培养皿上克隆细胞,也可在衬有琼脂的甲基纤维素的非组织培养用平皿制备细胞克隆。2、在这些支持物中应适当添加生长因子及添加物。3、如使用组织培养用平皿克隆细胞,应在灌制琼脂等支持物前

特殊细胞培养实验_球体细胞培养实验

实验方法原理大多数培养细胞都具有贴附在底物上生长成单层细胞的性质,如细胞长成片之后,让细胞片与底物脱离,更换到使细胞不易贴附的底物上继续生长时,则细胞片能卷聚成球体形,成为球体培养。实验材料细胞试剂、试剂盒Hanks培养液胰蛋白酶仪器、耗材吸管实验步骤1.  琼脂铺底的培养瓶30 ml无菌培养瓶,每

细胞培养实验

贴壁细胞培养 悬浮细胞培养             实验方法原理 实验材料

细胞培养实验

贴壁细胞培养 悬浮细胞培养             实验方法原理 实验材料 冻存细胞

细胞培养实验

实验方法原理 实验材料 冻存细胞试剂、试剂盒 70% 乙醇PBS胰酶/EDTA仪器、耗材 25 cm2 和 150 cm2 组织培养瓶CO2 培养箱实验步骤 1. 将含有冻存细胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解冻。2. 用 70% 乙醇对安瓿的顶端进行消毒,打开安瓿,用吸管将细胞转移到含有 5 ml 起

动物细胞培养,为什么要细胞贴壁生长

培养细胞有3种状态:贴壁、半贴壁、悬浮。对于贴壁生长的细胞来说,如果培养过程中发现细胞悬浮,则说明细胞生长不好或者死亡。对于另两类细胞来说,悬浮没什么不可以。 细胞贴壁生长时细胞生长的属性,贴壁生长的细胞还会抑制其增殖和活性,所以人们还要通过用稀释,分离,蛋白酶处理等方法使它们继续生长繁殖

小鼠肝细胞培养实验——细胞培养技术

实验方法原理直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养。原代培养是建立各种细胞系的第一步,是从事培养工作的人员应熟悉和掌握的最基本的技术。根据培养方法不同分为组织块培养法和单层细胞培养法。实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEMDMEM胰酶PBS仪器、耗材饭盒纱布小剪子小镊子大镊子大烧杯平皿研

结缔组织类细胞培养实验——巨噬细胞培养实验

实验方法原理巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。但属不繁殖型细胞群,难以长期生存,好的条件下仅能生活2~3 周,因之多用作初代培养。巨噬细胞也能建成无限细胞系;大多来自小鼠,如P388D-1、J774A.1、RAW

猪甲状腺细胞培养实验_细胞培养技术

实验方法原理由于甲状腺富含纤维性组织,所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法,用单一的胰蛋白酶消化效果一般;促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的,它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。实验材料猪甲状腺试剂、试剂盒F-12培养基胎牛血清胰蛋白酶胶原酶Ⅳ牛 TSH仪器、耗材眼科剪滴

大鼠肝星状细胞培养实验——细胞培养技术

大鼠肝星状细胞原代培养可以:(1)用于细胞保种;(2)用于分子生物学研究;(3)用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料雄性 SD 大鼠试剂、试剂盒戊巴比妥钠小牛血清DMEM

特殊细胞培养实验

一、二倍体细胞培养法 加支持物培养法 单细胞分离培养法 多孔塑料培养板单细胞克隆法 球体细胞培养实验 微载体细胞培养法 悬浮培养法

羊水细胞培养实验

            实验方法原理 羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞,可在体外培养用以检验胎儿核型。 试剂、试剂盒 碘酒 酒精 营养液

特殊细胞培养实验

实验方法原理 二倍体细胞来源体内二倍体细胞,也即正常细胞的初代培养。初代培养细胞成功后能始终保持二倍体细胞性状,便成为二倍体细胞培养。二倍体细胞虽不难培养,但欲求长期呈旺盛地增殖生长、并保持二倍体细胞性状,亦非易事。为此必须采取一些有效的措施,一是低温冻存,二是妥善的培养方法。用反复传代的方法以求获

肿瘤细胞培养实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 培养液Hanks胰蛋白酶EDTA胶原酶仪器、耗材 培养瓶离心管实验步骤 一、成纤维细胞排除法1.  机械刮除法 是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头(用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝),或裹少许脱脂棉制成,装入试管中高压灭菌后备用(也可用特制电热烧灼器刮除)。刮除程序为(1)标记镜下

肿瘤细胞培养实验

肿瘤细胞培养实验 提高肿瘤细胞培养存活率和生长率的实验             实验方法原理 肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃

传代细胞培养实验

实验方法原理 当初代培养成功,细胞生长增殖形成单层细胞后,进而扩展汇合,占满一切空间,此时需要进行分离培养。这一操作称传代或再培养。如拖延传代,细胞会因增殖过度,培养基营养枯竭和代谢产物积累而发生中毒。80%汇合或刚汇合细胞是理想传代阶段。实验材料 细胞试剂、试剂盒 Hanks胰蛋白酶EDTA培养液

肿瘤细胞培养实验

肿瘤细胞培养实验可用于:(1)研究肿瘤的发生机理;(2)研究生物学行为;(3)研究抗肿瘤药物。实验方法原理肿瘤组织及细胞在模拟体内生长环境的条件下、与一般组织细胞一样、也能够生长发育乃至繁殖、为研究癌变机理、抗癌药检测、肿瘤分子生物学提供大量的实验材料。实验材料肿瘤组织试剂、试剂盒培养液Hanks胰

传代细胞培养实验

            实验方法原理 当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒,如果不及时的减少细胞密度,细胞将逐渐衰老死亡

羊水细胞培养实验

实验方法原理羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞,可在体外培养用以检验胎儿核型。试剂、试剂盒碘酒酒精营养液血清秋水仙素醋酸甲醇仪器、耗材棉签棉球镊子穿针培养瓶实验步骤1.  抽取羊水无菌抽取羊水10~20 ml,立即注入无菌离心管中;2.  离心分离1000 转/分,离心10 分钟,去上清,留0.5 ml;

传代细胞培养实验

实验方法原理当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒,如果不及时的减少细胞密度,细胞将逐渐衰老死亡。因此需要将培养物按照比例重新接种到新的培养器皿(瓶)内进行

羊水细胞培养实验

实验方法原理 羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞,可在体外培养用以检验胎儿核型。试剂、试剂盒 碘酒酒精营养液血清秋水仙素醋酸甲醇仪器、耗材 棉签棉球镊子穿针培养瓶实验步骤 1.  抽取羊水无菌抽取羊水10~20 ml,立即注入无菌离心管中;2.  离心分离1000 转/分,离心10 分钟,去上清,留0.5

羊水细胞培养实验

羊水细胞培养实验实验方法原理羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞,可在体外培养用以检验胎儿核型。                          试剂、试剂盒碘酒                                                                  酒精    

肌组织细胞培养实验——心肌细胞培养实验

实验方法原理心肌组织是最早利用的培养材料,Carrel曾长期培养过鸡胚心肌组织,至今心肌仍不失为好的培养物。最常用的是鸡胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎儿心肌等都可应用。心肌是比较容易培养和生长的组织,可应用多种方法进行培养,如悬滴培养、组织块培养和消化培养法等,主要取心室肌培养,均能获得良好的生长效果。

肌组织细胞培养实验——神经组织细胞培养实验

实验方法原理神经组织主要由两种神经细胞(神经元)和神经胶质细胞组成。神经元为高度分化的细胞,在组织发生晚期已失掉增殖能力,对生存条件要求高,只有在适宜情况下,如接种在胶原底层上,或在加入神经生长因子(NGF)和胶质细胞因子时,才能生存,并可能出现一定程度的分化现象,如长出突起等,但却难使之增殖;即使

肌组织细胞培养实验——骨骼肌细胞培养实验

实验材料肌组织试剂、试剂盒Hanks胰蛋白酶血清胎汁仪器、耗材纱布实验步骤动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠(Wistar 大鼠更好)。1.  杀死动物,无菌取大腿肌组织,切成0.3~0.5 厘米小块;2.  用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消

特殊细胞培养实验_微载体细胞培养法

实验方法原理微载体细胞培养开始于60年代末期,最早使用离子交换凝胶作为载体,轻微搅动即可悬液在培养基中,因而可增加细胞附着的面积,达到大量培养细胞的目的。后来,根据细胞附着生长的特点,对微载体进行了改良,使其带有电荷或其它介质,更利于细胞附着和生长。这一方法亦可用于常规量的培养,也可用于大规模的培养