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实验步骤方 案 2. 14 由 h E S 细 胞 产 生 胚 胎 样 小 体试剂与材料无菌或无菌制备□ 生 长 于 M E F s 之上的未分化的 h E S 细胞集落□ 加样器，设置在 50ul□ 超 低 附 着 力 的 P e tri 培 养 皿（特 殊 包 被 过 的 皿 ，可 防 止 细 胞 附 着 ；见 2.9节） ， 2. 6 cm。□拉长的玻璃吸管（见方案 2.7)非无菌□ 带 有 37°C 加热台的解剖显微镜步骤(a) 在 超 低 附 着 力 的 P e tri 培 养 皿 中 加 人 2〜3 ml h E S 培 养 基 。(b) 从温箱中取出未分化的 h E S 细胞，放在解剖显微镜的加热的台子上。(C) 用拉长的玻璃吸管（见方案 2. 7) 将集落切成小块，块的大小大约与hES细胞手工传代切的大小（300〜500 个细胞）相同，要小心解剖，只取未分化的细胞。(d) 当集落的所有合适的区域都被分离，得到足够......阅读全文
实验步骤 方 案 2. 14 由 h E S 细 胞 产 生 胚 胎 样 小 体 试剂与材料 无菌或无菌制备 □ 生 长 于 M E F s 之上的未分化的 h E S 细胞集落 □ 加样器，设置在 50ul □ 超 低 附 着 力 的 P e tri 培 养 皿（特 殊 包
实验步骤 方 案 2.7 h E S 细 胞 的 手 工 传 代 试剂与材料 无菌或无菌制备 □ 生 长 于 M E F 之上的未分化的 h E S 细胞集落 □ 新 鲜 的 M E F 板（最好是在失活处理后 1〜3 天内） □ h E S 培 养 基（见 2. 2. 1 节
细 胞 培 养 基 成 分 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备 人 胚 胎 干 细 胞 系 的 建 立 h E S 细 胞 的 手 工 传 代 采 用 玻 璃 化 方 法 冻 存
细 胞 培 养 基 成 分 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备 人 胚 胎 干 细 胞 系 的 建 立 h E S 细 胞 的 手 工 传 代 采 用 玻 璃 化 方 法 冻 存
实验步骤 方 案 2. 11 通 过 焚 光 免 疫 细 胞 化 学 分 析 h E S 细 胞 的 特 性 试剂与材料 无菌或无菌制备 □ 生 长 于 0.1 % 明胶包被的玻璃盖玻片上的h E S 细胞 非无菌 □ 4 % 多聚甲醛 □ P B S A □ T ris-
实验步骤 方 案 2. 9 采 用 玻 璃 化 方 法 冻 存 h E S 细胞 试剂与材料 无菌或无菌制备 □ 生 长 于 M E F 饲养层之上的未分化的 h E S 细胞 □ hES-HEPES 培 养 基（见 2. 2. 2. 1 节） □ 1 0 % 玻 璃 化 溶 液
实验步骤 方 案 2. 6 人 胚 胎 干 细 胞 系 的 建 立 试剂与材料 无菌或无菌制备 □ 5〜6 天的人胚泡，经 H F E A 允许，并且像先前讨论的完全经病人同意。 HFEA所要求的全部细节能够在 H E F A 的网站找到（http//:www.hfea.g0v.u
实验步骤 2.3 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备 最广泛地用于支持 h E S 的伺养层细胞来自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎饲养细胞（MEFs) ，尽管它们可能是最原始的
实验步骤 2.2.5 BRL-条件培养基 B R L 细胞在大鼠肝细胞培养基（BRL-CM) 中生长至汇合，用新鲜培养基更换一次 ， 3 天后收集这些培养基。 所有培养基用无菌的、孔 径 0.2um 的 P E S 滤膜过滤，特别是来自其他细胞类型的条件培养基。应该注意的是：在细胞
体外分化法 实验方法原理 胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培