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实验方法原理将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料胰蛋白酶试剂、试剂盒硅油仪器、耗材克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤1. 观察细胞克隆，用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔（毡制粗头笔或者最好用 Nikon 标记笔或物镜标记笔，可插入显微镜物镜换镜转盘的位置，对所选的克隆集落划上标记）在培养皿底面对要分离的集落做标记。2. 撤去培养基，用 D-PBS 轻轻冲洗细胞克隆。3. 用无菌镊夹取一个克隆培养环（放在培养皿中干热或高温高压灭菌），蘸取硅油（于玻璃培养皿中160°C 干热灭菌 1 h , 或121°C 高压灭菌 15 min），硅油面朝下，压放在培养皿上，使硅油均匀分布在克隆培养环底面。4. 将环圈套于所需集落上。5. 在同一培养皿重复步骤 4、5 , 圈套 2~3......阅读全文
实验方法原理 将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。
实验方法原理将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料胰蛋白酶
实验方法原理 将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料 胰蛋白酶试剂、试剂盒 硅油仪器、耗材 克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤 1. 观察细胞克隆，用毡制粗头笔
实验步骤基本方案 过 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 备 腹 腔 巨 噬 细 胞材 料单核细胞增多性利斯特氏菌无 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠（见 表 A .2A .1)，包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培养基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V
封闭式试管培养 开放式盖玻片培养 实验方法原理 在标准培养箱（37°C ) 中用 Lei
封闭式试管培养 开放式盖玻片培养 实验方法原理 在标准培养箱（37°C ) 中用 Lei
实验方法原理在标准培养箱（37°C ) 中用 Leighton 塑料管培养细胞，然后用胰蛋白酶悬浮法收集细胞。实验材料羊水标本D-PBSA秋水仙酰胺胸腺嘧啶核苷溴脱氧尿核苷胰蛋白酶EDTAHistopaque-l077试剂、试剂盒完全培养液胰蛋白酶和EDTA混合液消毒剂如Virkon氯化钾低渗溶液固
调节瞬时转染基因的表达l 四环素作为哺乳动物细胞中可诱导基因表达的调控物阶段一：pTet-tTAk稳定转染成纤维细胞培养和转染细胞1. 在DMEM完全培养液中培
基本方案 过 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 备 腹 腔 巨 噬 细 胞材 料单核细胞增多性利斯特氏菌无 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠（见 表 A .2A .1)，包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培养基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V ) 台
从正常人和骨关节炎患者的关节软骨中分离软骨祖细胞实验实验方法原理 实验材料 人关节软骨试剂、试剂盒 胰蛋白酶 EDTA:胰蛋白酶（0.05%)和EDTA(0.53 mmol L)PBSA配制胎牛血清牛血清白蛋白（BSA)10μg ml和1 mg ml PBSC配制血清纤连蛋白 10μg m1 PBS
从人关节软骨中分离软骨祖细胞 从人滑膜中分离软骨祖细胞、培养、分化 人软骨祖细胞的分化 实验方法原理
试剂和材料： 1.骨关节炎患者行膝盖关节半切开手术时未累及的部分； 2.链霉蛋白酶消化培养基：DMEM/F12（1：1）、5%的F、抗坏血酸 50μg/ml、葡萄糖 1mg/ml、庆大霉素（50mg/ml），0.2%（终浓度100μg/ml）、链霉蛋白酶 70U/ml、HEPES 10mmo
CAR-T（T细胞嵌合抗原受体）作为一种免疫细胞治疗方案，在全球范围内吸引了包括学者、医生、患者、投资人的大量关注。然而CAR-T具体是什么，它的背后有什么样的故事、目前的研究状况如何，未来又将走向何方呢？ CAR-T带来的新曙光 自古以来，人们不断地与癌症进行斗争。科学家们考古发现的木乃伊
试剂和材料：1. 骨关节炎患者行膝盖关节半切开手术时未累及的部分；2. 链霉蛋白酶消化培养基：DMEM/F12（1：1）、5%的FBS、抗坏血酸 50μg/ml、葡萄糖 1mg/ml、庆大霉素（50mg/ml），0.2%（终浓度100μg/ml）、链霉蛋白酶 70U/ml、HEP
实验方法原理胰蛋白酶消化后，用 EDTA 分散从皮肤片分离的表皮片，然后用添加 bFGF（FGF-2）的无血清培养液培养。实验材料D-PBSA &
实验方法原理胰蛋白酶消化后，用 EDTA 分散从皮肤片分离的表皮片，然后用添加 bFGF（FGF-2）的无血清培养液培养。实验材料D-PBSA胎牛血清大豆胰蛋白酶抑制剂试剂、试剂盒添加激素的黑素细胞培养液胰蛋白酶和EDTA混合液仪器、耗材组织培养皿吸管离心管湿润的培养箱水浴箱电子细胞计数仪或血细胞计
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单
一、目的基因的获得 目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-
一、目的基因的获得目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-多聚酶链式
胸腺嘧啶核苷同步化收集1. 在收集细胞的前一天早上，用添加胸腺嘧啶核苷（用 D-PBSA 制备 15 mg/ml 储备液，过滤除菌。将 0.1 ml 胸腺嘧啶核苷储备液加入到 10 ml 培养液中。在收集细胞前更换使用胸腺嘧啶核苷培养液。在培养液中的终浓度应为 0.15 mg/ml）的培养液
◇水解乳蛋白 水解乳蛋白为淡黄色粉末，虽易潮解结块，但不影响使用。 不同批号和牌号质量有差异。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解后的产物，含有丰富的氨基酸。开始时它是专为猴肾细胞培养设计的，而实际上它对许多细胞系(株)，如Hela细胞和原代细胞都是一种优良培养基。使用时用Hanks液配制成0
第三节 微生物的分离经富集培养以后的样品，目的微生物得到增殖，占了优势，其他种类的微生物在数量上相对减少，但并未死亡。富集后的培养液中仍然有多种微生物混杂在一起，即使占了优势的一类微生物中，也并非纯种。例如同样一群以油脂为碳源的脂肪酶产生菌，有的是细菌，有的是霉菌，有的是芽孢
从人关节软骨中分离软骨祖细胞实验材料人关节软骨试剂、试剂盒胰蛋白酶 EDTA:胰蛋白酶（0.05%)和EDTA(0.53 mmol L)PBSA配制胎牛血清牛血清白蛋白（BSA)10μg ml和1 mg ml PBSC配制血清纤连蛋白 10μg m1 PBSC配制仪器、耗材尼龙膜40μm筛孔（“细胞
microRNA的实时定量茎环RT-PCR技术 摘要： 已开发出一种新型的microRNA（miRNA）的定量方法，即利用茎环反转录，Taqman PCR分析。茎环RT引物在RT 效率和特异性方面比传统的更好。TaqMan miRNA的检测是很具体的，可以检测成熟miRNA和区分
一、杂交通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
2.包涵体的分离与纯化细胞破碎时提取细胞内产物的关键。对于细菌的裂解常用的有酶溶法、超声破碎法、化学渗透法、玻璃珠研磨等。包涵体可通过超声波、匀浆等常规的方法是菌体破碎后，离心就可得到。密度梯度离心后可得到高纯度的包涵体。包涵体一般不溶于水，为了获得可溶性的蛋白质可加入强蛋白质变性剂后使其溶解。一般
分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也