报告基因实验——花青素表达的定量
实验材料植物组织试剂、试剂盒酸性乙醇或甲醇花青素-3-O-葡萄糖苷仪器、耗材滤膜实验步骤1. 瞬时表达研究植物组织经基因枪转化培养大约 12 h 后，转化细胞开始表现出深红色或者偶尔为深蓝色的斑点。颜色常常会向整个液泡扩散，从外表上看整个细胞都是红色的。在几天时间里，颜色将会增强，并且能在 1~2 周内保持稳定。对于有些细胞来说，其深色液泡内含物中的花青素或者 AVI [ 27 ] 会隐退，或者随着时间的推移慢慢地沉积下来，在这种情况下个体转化细胞更难以判断。尽管大量的细胞积累花青素后，可以用肉眼观察 ，但是统计转化细胞数目需要一台低倍立体显微镜。小麦品种 Cadenza 还在发育的糊粉层细胞，瞬时表达转化小麦 8S 球蛋白启动子控制的玉米 C1 和 R-Lc 基因。只有这两种载体 DNA 按相同摩尔数混合并通过基因枪转化，才能看到花青素积累。培养 3 天后，利用莱卡 MZ8 型立体显微镜拍摄，该显微镜配备莱卡 DFC300FX......阅读全文
报告基因实验——花青素表达的定量
实验材料植物组织试剂、试剂盒酸性乙醇或甲醇花青素-3-O-葡萄糖苷仪器、耗材滤膜实验步骤1. 瞬时表达研究植物组织经基因枪转化培养大约 12 h 后，转化细胞开始表现出深红色或者偶尔为深蓝色的斑点。颜色常常会向整个液泡扩散，从外表上看整个细胞都是红色的。在几天时间里，颜色将会增强，并且能在 1~2
报告基因实验
实验方法原理报告基因是一个分子生物学概念，它是指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：①已被克隆和全序列已测定；②表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中
GUS报告基因的定性和定量检测
一、GUS报告基因的定性检测 GUS能与显色底物X-gluc 反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS 染色的稳定性好，组织定位精确，成为在植物中运用很广的报道基因。 1. GUS染色底物的配制 试剂名称 母液
定量－PCR－基因表达的实验数据应如何处理？
总的来说，有三个层次的校正是必须要做的。 参比信号校正。试剂中必须包含固定浓度的 ROX，这样由于反应总体积的差异、所在孔的位置不同、试管壁的厚度差异、管盖透光性能的差异等所引起的荧光信号波动都能够被扣除，使数据真正反映 PCR 进程。ROX 校正能够极大地改进定量的精确度，提高重复管之间的
报告基因实验——MUG－荧光分析
实验材料组织提取物试剂、试剂盒GUS 缓冲液MUG仪器、耗材96 孔板数显荧光计实验步骤1. 分别取 25 ul 和 50 ul 组织提取物样品于 96 孔板中（黑色或者白色），包括未转化的对照组织，加 GUS 缓冲液至总体积为 200 ul，混匀。2. 加入 100 μl 含 2.5 mg/ml
转染实验常用的报告基因（植物、动物）
报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其 它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
双荧光素酶报告基因实验原理
双荧光素酶报告基因实验原理具体如下：双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。双荧光素酶报告基因实验是一种基因表达定量分析技术，通过将双荧光素酶Luciferase作为报告基因插入到需要研究的靶基因启动子区域或转录后区域，使其与靶基因协同表达。当荧光素基
双荧光素酶报告基因测试
在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因
报告基因实验——荧光蛋白（FP)－的显微检测
实验材料活体组织仪器、耗材落射荧光显微镜汞灯实验步骤表达突光蛋白的材料一般首先用落射荧光显微镜（epi-fluorescent microscopy) 来观察 ，尤其当研究表皮上表达的荧光蛋白或者用反褶积软件去掉从焦点之外采集的荧光时[18]。然而，对于较厚的材料，必须使用共聚焦显微镜，因为它可以
表达蛋白检测实验
免疫印迹法 免疫沉淀法 点印迹法 实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是
表达蛋白检测实验
实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒
什么是LUC基因
LUC基因指报告基因，是一个分子生物学概念，它是指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：已被克隆和全序列已测定；表达产物在受体细胞中本不存在，即无背景，在被转染的细胞中无
报告基因的应用
实验概要报告基因被广泛地应用于细胞生物学中的基因表达和细胞相关内容的研究。常用的报告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、绿色荧光蛋白基因及萤火虫荧光素酶基因等。在这些报告基因中萤火虫荧光素酶基因因其表达产物－荧光素酶敏感性高，测定方法快速且宜于掌握，线性好，并且荧光素
基因表达的系列分析实验
实验材料 玻璃及塑料器皿 试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 引物
基因表达的系列分析实验
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技术的一种高灵敏度研究基因表达的方法，可得到 mRNA 文库的定性及定量信息。自 1995 年此技术产生以来，发表了大量的相关文章，表明 SAGE 可同时检测大量基因的表达水平的变化。实验材料玻璃及塑料器皿试剂、试剂盒溶液与缓冲液引
基因表达的系列分析实验
实验材料 玻璃及塑料器皿试剂、试剂盒 溶液与缓冲液引物仪器、耗材 试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤 一、一般原则若用于 SAGE 的 RNA 有足够的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按实验方案 A 进行。这里我们还提供了实验方案 B，它在多
花青素含量的测定
原理 花青素是植物体内广泛分布的色素之一，属黄酮类化合物，黄酮类化合物在植物生长中起调节作用，已受到人们的重视。 花青素在不同pH条件下，呈现不同的颜色，在酸性中为红色，其颜色深浅与花青素含量成比例，用比色法即可进行测定，方法简单易行。 仪器药品 721型分类光度计 温箱 1
基因蛋白表达水平的双向定量调控研究获突破
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/9/508171.shtm
重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量
重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量按Qiagen公司的操作手册进行，具体步骤如下。一、重组蛋白质的诱导表达1.挑取转化有质粒的单菌落，接种于3ml 选择性LB液体培养基中，37 oC，250 rpm/min振摇培养过夜。2.次日将培养过夜的菌液500 μl再接种于10 ml（1:20）选择性LB液体
重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量
一、重组蛋白质的诱导表达1.挑取转化有质粒的单菌落，接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中，37 oC，250rpm/min 振摇培养过夜。2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10 ml（1:::20）选择性 LB 液体培养基中，37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密
报告基因：β半乳糖苷酶的原位染色实验
试剂、试剂盒 D-PBSA 染色液质粒实验步骤 一、材料非消毒物品 1. D-PBSA2. 底物：X-gal（nvitrogen），以二甲基甲酰胺配成 20 mg/mL，用多聚丙烯管-20℃ 避光保存，最长可达 6 个月 3. 固定液：1.8% 的甲醛和 0.05% 戊二醛，均以 PBSA 液配制；
报告基因：β半乳糖苷酶的原位染色实验
原位染色技术 实验方法原理 β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子，通过原位染色，在普通的光学显微镜下就可以用于检测到β-半乳糖苷酶的表达。
报告基因实验——GUS－活性的组织化学检测
实验材料组织试剂、试剂盒HGUS 缓冲液磷酸盐缓冲液乙醇溶液仪器、耗材微量滴定板或者试管实验步骤1. 将组织置于新配制的 HGUS 缓冲液中（含有 X-Gulc 及其他添加物），足以完全浸没材料，试验在微量滴定板或者试管中进行。2. 吸真空 5~10 min，然后去掉真空条件。3. 铝箔包裹，37
报告基因：β半乳糖苷酶的原位染色实验
原位染色技术 实验方法原理 β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子，通过原位染色，在普通的光学显微镜下就可以用于检测到β-半乳糖苷酶的表达。
定量PCR实验
实验材料 限制性内切核酸酶反转录酶热稳定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸试剂、试剂盒 扩增缓冲液dNTP 贮存液胎盘 RNase 抑制剂仪器、耗材 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR 仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液4 种 dNTP 贮存液（20
iRNA干扰GFP表达实验
【原理】RNA沉默是发生在植物（转录后基因沉默或共抑制）、动物（RNA干扰，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物细胞中的的特异性和高效率的mRNA降解机制。在哺乳动物细胞中，RNAi通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链siRNAs(smallinte
iRNA干扰GFP表达实验
实验概要本文介绍了iRNA干扰GFP表达实验的原理及方法步骤。实验原理RNA沉默是发生在植物（转录后基因沉默或共抑制）、动物（RNA干扰，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物细胞中的的特异性和高效率的mRNA降解机制。在哺乳动物细胞中，RNAi通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。将靶向特
荧光定量pcr为什么能够测基因表达差异
荧光定量PCR会加入带有荧光基团的探针，探针是能和目的基因结合的单链DNA，如果合成双链DNA后，荧光基团就会激活发光，所以实时检测反应物的荧光强度，反应的就是双链DNA的浓度，由于合成双链DNA的速率和模板浓度有关，所以和参考曲线比较以后是可以计算出模板的相对浓度，当模板是信号RNA是，其反应的就
利用实时定量PCR分析基因相对表达量
METHODS 25, 402–408 (2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2－△△CT MethodKenneth J. Livak* and Thomas
报告基因分类及优缺点
报告基因（reporter gene）是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，其表达产物非常容易被鉴定。把它的编码序列和基因调节序列相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。作为报告基因必须具备的条件：（1）全序列已测定（2）表达产物在手提细胞中不存在，即无背景，