细胞消化胰酶的配制
适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌 〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2+，增加消化效力 ......阅读全文
细胞消化胰酶的配制
适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl
细胞传代消化时所用胰酶的浓度
细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要
如何选择合适细胞的消化酶重组胰酶和动物源胰酶
培养细胞的老师们都知道细胞的生命是极其脆弱的在培养过程中有哪些行为是比较伤害细胞的呢？在培养贴壁细胞过程中消化过程在一定程度上是对细胞的一种折磨但是又不得不进行这个过程所以如何做好细胞消化善待细胞们是我们一定要了解的步骤~ 胰酶的作用原理胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基
细胞原代培养实验——胰酶消化法
细胞原代培养可以：（1）为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段；（2）为传代培养创造条件；（3）服务于临床实践，用于药物筛选等。实验方法原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、
原代培养的细胞每次用胰酶消化去除杂细胞
可能是消化时间过长引起的。每种细胞消化时间都不一样，得自己摸索条件。加入胰酶后，注意观察细胞，在细胞开始收缩的适当时间里就得及时终止，否则对细胞损伤很大。
细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反
细胞传代消化时所用胰酶浓度是否越高越好？
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca2+, Mg2+和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 ℃ 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗
小鼠肝细胞原代培养实验——胰酶消化法
小鼠肝细胞原代培养可用于：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS
细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反
怎样胰酶消化过久会提高细胞的凋亡率
一般说来，胰酶消化时间过长，对细胞会造成损伤，影响其活力，甚至细胞破碎。如果胰酶消化时间过长，就要注意在加入胰酶消化前先用PBS冲洗一下培养瓶，这样可提高胰酶消化能力，缩短消化时间；另外，可以在配制胰酶时加入EDTA，这样就更易消化细胞。如果细胞长久不贴壁，可试用下面的方法：1、将细胞接种到培养后，
用胰酶消化贴壁细胞一般消化多长时间
因细胞而异如成纤维细胞很好消化（一分钟），而上皮细胞对胰酶很赖受，要很长时间。心肌细胞只要0.25的酶，2-3分钟即可，不用放入培养箱
大鼠肝星状细胞原代培养实验_胰酶消化法
大鼠肝星状细胞原代培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD大鼠试剂、试剂盒戊巴比妥钠小牛血清DMEM酶消化液
大鼠星型胶质细胞培养实验——胰酶消化法
实验材料SD大鼠试剂、试剂盒苯巴比妥解剖液胰蛋白酶DnaseDM培养液仪器、耗材离心管培养箱手术器材实验步骤一、 取14.5d SD大鼠一只。二、 苯巴比妥0.5 ml 腹腔注射，待麻醉后置于手术台上，酒精棉球消毒皮肤，开腹取出子宫（约12-14个），放入解剖液中，剖开子宫，取出胚胎，放入解剖液中，
方案5－蛋白质的胰酶消化实验
实验材料冻干的目标蛋白质试剂、试剂盒CaCl2NH4HCO3苯甲基磺酰氟（PMSF)胰酶贮存液Tween-20仪器、耗材聚丙烯试管水浴箱实验步骤1.冻干的蛋白质底物溶解在 1% 的碳酸氢铵中，控制使用尽量少的溶液体积，以达到较高的底物浓度。当蛋白质底物很微量（如小于 1mg) 时，加入 Tween-
hela细胞用胰酶消化后会改变细胞的有丝分裂期吗
这个要看胰酶的作用强度和作用时间了。如果控制得当，影响不大。
基因重组胰蛋白酶与传统胰酶的消化对比
胰蛋白酶（Trypsin）是一种丝氨酸蛋白水解酶。其前体为无生物活性的胰蛋白酶原（trypsinogen），产生于胰脏。随胰液分泌到小肠中，被小肠中的肠肽酶激活后，能将蛋白质分解为多肽，进而分解成为氨基酸。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端。故在体外细胞培养中，胰蛋白酶被用于消化贴壁细胞
大鼠肺成纤维细胞原代培养实验——胰酶消化法
大鼠肺成纤维细胞培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 实验材料Wistar乳鼠试剂、试剂盒PBS牛血
胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞
1. 去除培养基。 2. 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS。 3. 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。 4. 37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。 5. 向细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验_胰酶消化法1
实验方法原理将小鼠的胚胎成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料孕鼠试剂、试剂盒PBSEDTA胰酶MEF生长培养基FBS高糖DMEM仪器、耗材眼科直剪眼科直镊眼科弯镊玻璃平皿3尼龙滤网离心管手术
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养实验_胰酶消化法2
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)原代培养可应用于：（1）细胞保种；（2）分子生物学研究；（3）基因治疗相关研究。实验方法原理将小鼠的成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料小鼠试剂、试剂盒PB
胰酶
制法要求本品应从检疫合格的猪、羊或牛胰中提取所用动物的种属应明确,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求性状本品为类白色至微黄色的粉末;微臭,但无霉败的臭气;有引湿性;水溶液煮沸或遇酸即失去酶活力。检查脂肪取本品1.0g,置具塞锥形瓶中,加乙醚10ml,密塞,时时旋动,放置约2小时后,将
胰激肽原酶
制法要求本品应从检疫合格的猪胰中提取,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。本品来源于动物,在生产过程中应采用适宜的病毒灭活工艺等方法进行病毒安全性控制。性状本品为白色或类白色粉末;无臭本品在水中易溶,在乙醇或乙醚中几乎不溶鉴别(1)照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液
胰酶使用注意及贴壁细胞
胰酶使用注意：1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。贴壁细胞的消化：1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，根据
细胞纯化酶消化法的方法介绍
酶消化法是比较常用的纯化方法，不仅对贴壁细胞可行，能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，使两者分开，达到纯化的目的，对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化也是十分有效的。
细胞人工纯化的酶消化法介绍
酶消化法是比较常用的纯化方法，不仅对贴壁细胞可行，能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，使两者分开，达到纯化的目的，对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化也是十分有效的。 (1)上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化 两者在胰蛋白酶的作用下，由于成纤维细胞先脱壁，而上皮细胞要消化相当长
胰酶的制法要求
本品应从检疫合格的猪、羊或牛胰中提取所用动物的种属应明确,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求
胰酶的检查方法
胰蛋白酶照紫外-可见分光光度法(通则401)测定。氯化钙溶液取氯化钙1.47g,加水500ml使溶解,用0.lmol/L盐酸溶液或0.lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0~6.2硼酸盐缓冲液取硼砂2.85g、硼酸10.5g与氯化钠2.50g,加水使溶解并制成1000ml,调节pH值至7.5±0
胰酶分离提取
一、原理与目的提取制备酶的经典方法，多采用硫酸铵分级沉淀，胰酶在75%饱和度硫酸铵中沉淀，其它杂蛋白一般在10%硫酸铵饱和度下被沉淀而除去。经此多次提取，最后在PH8.0硼酸缓冲液中得到结晶。胰酶在PH3.0时最稳定，可在低温下储存较长的时间而不失活；低与此PH酶易变性；高于PH5时，酶易自溶而失活
细胞培养过程中消化液的相关介绍
消化液:取材进行原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液，传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来，常用的消化液有胰酶（Trypsin）溶液和EDTA溶液，有时也用胶原酶（collagenase）溶液。 1.胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常见有1：125和1：250，即一
细胞组织消化常用的几种酶的选择
直接从生物体获取的组织，一般需要将其消化成单个细胞才能进行体外培养。这种直接从离体组织获得的细胞，更接近于生物体内的生活状态，且生物性状尚未发生很大改变，因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多领域备受欢迎。但组织消化过程中常遇到多种问题，例如消化不完全、细胞死亡率高等。如何克服这些问题