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AFLP标记技术

实验概要AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来(附图)。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。实验中,根据需要通过选择在末端上分别填加了1~3个选择性核苷的不同引物,可以达到选择性扩增的目的。这些选择性核苷酸使得引物能选择性地识别具有特异配对顺序的内切酶片段,进行结合,导致特异性扩增。主要试剂Taq酶 EcoR I/ Mse I EcoR I/ Mse I接头 E A引物M C引 物T4 DNA&nb......阅读全文

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如

农作物种子纯度鉴定方法综述4

4.2 SSR(Simple sequence repeat,简单序列重复标记)由Moore等于1991年创立。SSR即微卫星DNA,是一类由几个(多为1~5个)碱基组成的基序(motif)串联重复而成的DNA串联重复序列,其长度一般较短,广泛分布于基因组的不同位置,如(cA)n、(AT)n、(GG

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

基因多态性的检测方法概述

多态性(polymorphism)是指处于随机婚配的群体中,同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中,个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因(DNA)的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类,即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性

基因多态性的检测方法

多态性(polymorphism)是指处于随机婚配的群体中,同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中,个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因(DNA)的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类,即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性

常用的几种分子标记

RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段,一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段,利用凝胶电泳分开扩增的片段,从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术,并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术,因此简便易行。 SSR

基于 AFLP 的转录表达谱分析

实验材料Total RNA试剂、试剂盒链霉亲和素包被的磁珠洗涤缓冲液EDTA第一链缓冲液第二链缓冲液DTT4 dNTP 的混合物SuperScript IIRNase HSTEXTris· ClRL缓冲液ATPPCR 缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液加样染料硅烷黏合硅烷溶液变性聚丙烯酰胺凝胶TBE 分

SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用2

2玉米DNA指纹库的构建2. 1利用SSR分子标记构建玉米DNA指纹库目 前,国内外对玉米种质鉴定采用的遗传标记仍以形态标记为主,参考同工酶和种子贮藏蛋白标记。但形态标记的表现受环境影响较大,鉴定工作量大,周期长,受季 节限制。同工酶和种子贮藏蛋白标记多态性不够丰富,同工酶还存在组织和器官特异性,取

牧草DNA指纹图谱应用前景看好

  牧草品种的真假和种子质量的优劣直接关系到草业生产安全、农民增收和农(牧)区社会稳定。随着农牧业生产对优良牧草品种需求的提高,每年进入市场的育成牧草新品种数量也在快速增加,各种优良牧草品种越来越受到青睐,种植面积越来越大。而一些不法商家在利益驱动下,在种子生产经营过程中以假乱真、以次充好,坑农害农

植物RAPD分析技术

RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA),意为随机扩增多态性DNA,是利用PCR技术进行随机扩增,把扩增的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,根据DNA条带的多态性来反应模板DNA序列上的多态性。RAPD同AFLP、SSR等分子标记一样都基于PCR扩增,只

从基因组到新品种 一根黄瓜也能“顶天立地”

  1月8日是2018年度国家科技奖励大会召开的日子。2018年度国家自然科学奖二等奖和科技进步奖二等奖获奖团队部分成员黄瓜的驯化过程  清晨,黄三文和顾兴芳在进入人民大会堂参加大会之前合了一张影,成为他们科研友谊的见证。  他们同来自中国农业科学院蔬菜花卉研究所(以下简称蔬菜所),同样研究黄瓜,在

激光显微细胞分离技术

  在基础医学研究中涉及越来越多的如某一疾病状态组织中,多种基因或遗传变化,区别发展中的组织细胞群以及疾病状态组织细胞,将有助于了解疾病发生的分子机制。因此,在下一代的分子分析方法将需要进入微观世界及自动化程度高。对某一特殊个体的切片进行遗传指纹图谱鉴定,将有助于诊断及指导治疗。 

SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用1

SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用 康丽丽 周鸿飞(沈阳农业大学农学院) 玉 米是一种重要的饲用、粮用和工业加工作物,在国民经济中占有重要的地位。玉米育种方法的改进对农业发展具有重要意义。长期以来,育种家们大多数是借用易于 鉴别的形态学和同工酶等遗传标记来辅助育种,并取得了很大成功

用PCR进行基因分型

与许多一次做数百块Southern blots的研究人员一样,我第一次用PCR做基因分型(genotyping)时觉得见效很快,不再需要等几天才能看到结果,不再需要DNA显微图像或者操作紫外线了。随着技术的不断进步,RCR使基因组学和转录组学发生了翻天覆地的变化,甚至随着免疫PCR的普及开始进军蛋白

用PCR进行基因分型-1

与许多一次做数百块Southern blots的研究人员一样,我第一次用PCR做基因分型(genotyping)时觉得见效很快,不再需要等几天才能看到结果,不再需要DNA显微图像或者操作紫外线了。随着技术的不断进步,RCR使基因组学和转录组学发生了翻天覆地的变化,甚至随着免疫PCR的普及开始进军蛋白

法医物证检测中DNA分析技术的应用

法医物证检测中DNA分析技术的应用摘 要:本文以DNA 分析技术为研究对象,对其常见技术在法医物证检测中的应用进行了探究,以期拓 展法医鉴定范围、增强物证检测质量的目的。   随着现代生物学和医学的发展, 逐步形成了许 多DNA提取、鉴定和分析技术。 这些技术在多个领 域中得到了

生物检测技术在食品检验中的应用研究

  [摘 要]本文以生物检测技术为例,通过阐述其在食品检测中的意义,介绍了生物检测技术的主要内容,并分析了生物检测技术在食品检验中的应用。   引言   食品安全及质量与人们生活健康息息相关,也是影响食品工业发展及对外贸易的重要因素。近些年发展的生物技术检测方法因其特异的生物识别

Nature报道一种新型电泳技术:液晶电泳

      摘要: 来自美国肯特州立大学(Kent State University)的研究人员发现了一种新型电泳技术:向列液晶(nematic liquid crystal)电泳技术,这一技术未来也许将为生命科学领域提供新颖的分离技术,这一研究成果

重测序构建芝麻超高密度图谱以及花序基因的定位

连锁分析寻找QTL位点,是最经典的性状定位方法。而遗传图谱的密度是限制定位精度的其中一个方面。目前,构建图谱的方法已从基于传统的SSR、AFLP等基于片段长度多态性的分子标记,过渡到了基于SNP芯片或NGS测序的SNP分子标记。NGS测序最常用的是简化基因组测序和全基因组重测序,区别在于标记数量的多

水生所揭示出异育银鲫“中科3号”培育形成的机制

  异育银鲫“中科3号”是中国科学院水生生物研究所桂建芳研究员等在鉴定出可区分银鲫不同克隆系的分子标记,证实银鲫同时存在单性雌核生殖和有性生殖双重生殖方式的基础上,利用银鲫双重生殖方式,从D系银鲫(♀)与A系银鲫(♂)交配所产后代中筛选出少数优良个体,再经雌核生殖增殖扩群,经多代生长对比养殖试验评价

AFLP技术

实验概要本实验介绍了AFLP(amplified fragment length polymorphism)技术。AFLP是一种建立在PCR基础上的限制性片断长度多态性分析,是一种重要而有效的分子标记技术。主要试剂AFLP试剂盒、测序胶、银染试剂主要设备PCR仪、银染设备实验步骤1. 总DNA提取(

第二届全国药品质量分析论坛圆满闭幕

  2011年4月20日,第二届全国药品质量分析论坛的第二天,首先进行了为期半天的分会报告,从事化学药品、生化药品、中药、中药注射剂、药包材/药用辅料的专家学者继续给出了精彩的报告,每场报告后都进行了热烈的互动交流。下午,来自中国食品药品检定研究院的林瑞超教授、江苏省食品药品检验所的樊夏雷主任、国家

北京出入境研发出微生物“马达”快检技术

课题研发人员在进行业务研讨  俗话说,病从口入。有时人们在外面吃饭闹个肚子,最多去医院,买点消炎药就算了,根本不会想到这可能是由于致病微生物引起的食物中毒事件。对于老百姓来说,微生物引起的食源性疾病其实就在身边。  但很多时候,看不见的微生物经常会隐匿于食物和各种环境中,稍不留神就可能遭到它们的袭击

食品中沙门氏菌的检测方法

生吃西红柿等新鲜的时蔬水果是再平常不过的事了。然而,2008年6月在美国中西部和南部30个州,却有数百人因生食了从超市或是餐馆购买的新鲜西红柿而出现发烧、腹泻、腹痛等症状,其中有几十人因病情严重需住院,甚至有重症病人死亡 。这就是2008年发生的“西红柿事件”,不仅使美国人惊恐不已,也引起

样品总RNA的提取

实验概要本实验介绍了样品总RNA的提取方法。完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即:样品细胞或组织的有效破碎;有效地使核蛋白复合体变性;对内源RNA酶的

总RNA的提取

 完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)有

分子标记方法:AFLP原理和操作步骤

AFLP原理:AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘

AFLP分子标记实验

其基本原理是:以PCR(聚合酶链式反应)为基础,结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”,用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3-端严格配对的片

九大测序平台对比(一)

1.sanger企业:Life Technology推出时间:1977年发明,1986年第一台商业化测序仪主流型号:3730XL样品要求:PCR产物:浓度≥50ng/ul 体积≥10ul;质粒:含量≥5ug;菌液:体积≥1ml。测序原理:双脱氧链终止法:Sanger法测序的原理就是,每个反应含有所有

分子标记——AFLP原理和操作步骤

一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺