银染

1.将固定液中的凝胶摇动过夜或至少1小时。2.将保温液中的凝胶轻微振荡2小时。3.去离子水清洗凝胶3次,每次20分钟。4.将硝酸银溶液中凝胶轻微振荡30分钟。5.用去离子水快速洗胶30秒。6.将定影液中凝胶摇动5~30分钟,时间由所加的蛋白质量决定。7.如果已经达到所需的颜色深度,将凝胶放到定影液中最少15分钟。8.换定影液。在暗处,4℃定影液中凝胶可保存几个月。......阅读全文

银染

1.将固定液中的凝胶摇动过夜或至少1小时。2.将保温液中的凝胶轻微振荡2小时。3.去离子水清洗凝胶3次,每次20分钟。4.将硝酸银溶液中凝胶轻微振荡30分钟。5.用去离子水快速洗胶30秒。6.将定影液中凝胶摇动5~30分钟,时间由所加的蛋白质量决定。7.如果已经达到所需的颜色深度,将凝胶放到定影液中

银染实验

试剂、试剂盒 甲醇(50% 和5%v v)二硫苏糖醇 AgNO3柠檬酸(固态)显影液实验步骤 试剂甲醇(50% 和5%v/v)10umol/L二硫苏糖醇(DTT)AgNO3(0.1%w/v)柠檬酸(固态)显影液操作程序此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下,凝胶在旋转平台上缓

银染实验

银染实验             试剂、试剂盒 甲醇(50% 和5%v v) 二硫苏糖醇 AgNO3

银染实验

试剂、试剂盒甲醇(50% 和5%v v)二硫苏糖醇AgNO3柠檬酸(固态)显影液实验步骤试剂甲醇(50% 和5%v/v)10umol/L二硫苏糖醇(DTT)AgNO3(0.1%w/v)柠檬酸(固态)显影液操作程序此操作程序是根据Merril(1987)的方法修改而成。室温下,凝胶在旋转平台上缓慢摇动

银染的应用

主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测,如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究 。

SSR银染方法

SSR银染方法(轻轻震荡)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗(1)蒸馏水 1-2min(2)0.002% Na2S2O3 1-2min(3)显色1.5%NaOH + 0.4%甲醛(4)保存0.75%Na2CO3

核酸的银染方法

核酸硝酸银染色:参考《锌对缺血再灌注大鼠肝脏金属硫蛋白一1基因表达的影响》营养学报2000年第22卷第4期294-297取PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳,所得凝胶进行硝酸银染色.程序如下:(1)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液中固定6 min;(2)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液

银染实验用水指南

SDS聚丙烯酰胺凝胶染色是蛋白质研究的一个基础方法。染色方法有很多,实际应用中,考马斯亮蓝染色(考染)和银染是运用的最多的方法。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,它与蛋白质结合后变为蓝色,结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。银染实验中

PCR-产物电泳银染实验

实验方法原理 聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由丙烯酰胺单体和交联剂亚甲基双丙烯酰胺,在引发剂过硫酸胺(AP)提供自由基和催化剂四甲基乙二胺(TEMED)的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光线诱发聚合,所以其水溶液应贮藏在棕色瓶中,置低温 4℃ 更佳。由于其水溶液稳定性较差,通常 2 个月内用完为好。

PCR-产物电泳银染实验

            实验方法原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是由丙烯酰胺单体和交联剂亚甲基双丙烯酰胺,在引发剂过硫酸胺(AP)提供自由基和催化剂四甲基乙二胺(TEMED)的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光线诱发聚合,所以其水溶液应贮藏在棕色瓶中,置低温 4℃ 更佳。由于其水溶液稳定性

PCR-产物电泳银染实验

常用的核酸电泳法有两种。①水平电泳:琼脂糖凝胶,紫外光下判断条带。此法经济省时,但分辨率较低。②垂直电泳:聚丙烯酰胺凝胶,可见光下判断条带。此法相对费力,但分辨率较高。分辨率高是聚丙烯酰胺电泳法被优先用于克隆性基因重排条带判断的关键。在聚丙烯酰胺凝胶上较宽弥散被判断为假阳性(阴性)的条带,在琼脂糖胶

银染实验的操作流程

实验目的检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。实验原理在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。试剂:乙醇、冰醋酸(纯乙酸)、乙酸钠、硫代硫酸钠

银染的功能与方法特点

银染是一种检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的方法,其原理是银离子在碱性 pH 环境下被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上显色。银染的方法种类很多,有文献报道的就有 100 多种。但是其准确的染色机制还不是特别地清楚。由于银染的灵敏度很高,可染出胶上低于 1ng 的蛋白质点,故广泛地用在 2D 凝胶分析上,

银染(silver-staining)操作规程

实验原理:在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。 试剂:乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na

DNA测序——非同位素银染

实验方法原理Promega公司的SILVER SEQUENCETM DNA测序系统是一种无放射性的序列分析系统,它通过灵敏的银染方法检测凝胶中的条带。 银染提供了一种对于放射性或荧光法来说更加快速,廉价的替代方法。测序结果可以在同一天内得到;电泳完成后经90分钟就可读序,这是常规的放射性测序法做不到

关于DNA测序测序凝胶的银染

  染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子,大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。  1. 电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板,凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。  2. 固定凝胶:将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘,用固定/停止溶液浸没,充分振荡20分钟或直至样品

银染实验的操作注意事项

1.固定时间较长,则加一步水洗30min,以免胶太脆而破碎。2.甲醛在使用前加入。3.最好多配制一份显色液,第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液,显色到点清晰。4.显色过程很快,要注意把握时间,避免染色过度。5.银染液和显色液需要预冷。6.所用器皿要很洁净,不用手直接接触,以免杂蛋白污染!7.清洗用

银染后可以做质谱吗

不行 质谱要求样品是纯度是分析纯,银染后蛋白质分子结合了银,即使提纯后再做质谱分析也没有意义了,你可以将样品分成两份,一份跑电泳,另一份做质谱。

蛋白质染色实验——银染法

实验材料蛋白质试剂、试剂盒脱色液戊二醛硝酸银洗印显影液仪器、耗材培养箱摇床实验步骤1.  将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖,在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。 2.  倾去固定液,加5倍凝胶体积的脱色液,缓慢摇动60 min 以上。 3.  倾去脱色液,加5倍凝胶体积的10

低背景的蛋白质银染方法

我们做蛋白质电泳的人都知道,银染色很灵敏,有很强的说服力,但通常胶背景较深,不易扫描。在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim

蛋白质染色实验——快速银染法

实验材料蛋白质试剂、试剂盒甲醛固定液硫代硫酸钠干胶液甲醇仪器、耗材摇床透析膜实验步骤1. 将凝胶置于塑料容器中,加入50 ml 甲醛固定液,在旋转摇床中缓慢摇动10 min。 2.  倾去固定液,用水冼两次,每次5 min,缓慢摇动。 3.  倾去水,凝胶浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸钠溶液中1 m

非同位素银染测序系统操作技术

  Promega公司的SILVER SEQUENCETM DNA测序系统是一种无放射性的序列分析系统,它通过灵敏的银染方法检测凝胶中的条带。银染提供了一种对于放射性或荧光法来说更加快速,廉价的替代方法。测序结果可以在同一天内得到;电泳完成后经90分钟就可读序,这是常规的放射性测序法做不到的。 此外

影响DNA测序技术测序产物银染的因素

  1. 水的质量对于染色的成功极其重要。超纯水(NANOpureR 或Milli-QR 的水)或双蒸水可获得较好的效果, 如果水中有杂质, 则低分子量条带可能无法出现。  2. 碳酸钠也非常重要。使用新鲜的,美国化学学会级碳酸钠较好,如Fisher和Kodak ACS试剂级碳酸钠(Fisher C

DNA测序测序凝胶的银染的影响因素

  测序产物的银染是显现序列信息的一种新方法,本系统的成败受几个因素的影响  ① 水的质量对于染色的成功极其重要。超纯水(NANOpureR或Milli-QR的水)或双蒸水可获得较好的效果,如果水中有杂质,则低分子量条带可能无法出现。  ② 碳酸钠也非常重要。使用新鲜的,美国化学学会级碳酸钠较好,如

蛋白质染色实验——非氨盐银染法

实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒 DTT硝酸银碳酸盐显影液柠檬酸 仪器、耗材 摇床 实验步骤 1.  将凝胶置于玻璃或聚乙烯容器中,加入100 ml 固定液,在旋转摇床中缓慢摇动30 min。   2.  倾去固定液,将凝胶浸没在脱色液中,缓慢摇动3

银染核仁形成区的标本制备及观察实验

基本方案             实验方法原理 生化和免疫化学研究证明银染蛋白是RNA聚合酶I,其功能是催化rDNA转录rRNA形成核仁,因此通过这种反应能够特异显示rRNA转录的活

关于DNA测序技术的测序凝胶的银染介绍

  染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子,大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。  1.电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板,凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。  2. 固定凝胶:将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘,用固定/停止溶液浸没,充分振荡20分钟或直至样品中

低背景的蛋白质银染(silver-staining)方法

我们做蛋白质电泳的人都知道,银染色很灵敏,有很强的说服力,但通常胶背景较深,不易扫描。在这里介绍一下低背景的蛋白质银染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim

银染核仁形成区的标本制备及观察实验

基本方案             实验方法原理 生化和免疫化学研究证明银染蛋白是RNA聚合酶I,其功能是催化rDNA转录rRNA形成核仁,因此通过这种反应能够特异显示rRNA转录的活

银染核仁形成区的标本制备及观察实验

实验方法原理 生化和免疫化学研究证明银染蛋白是RNA聚合酶I,其功能是催化rDNA转录rRNA形成核仁,因此通过这种反应能够特异显示rRNA转录的活性。实验材料 HL-60细胞HeLa细胞试剂、试剂盒 Carnoy固定液HCl甲酸AgNO3蛋白胶硫代硫酸钠戊二醛乙醇丙酮醋酸铀柠檬酸铅染液仪器、耗材