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蛋白质免疫印迹(WesternBlot,WB)

实验方法原理 Western免疫印迹,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,探针是抗体,显色用标记的二抗。 经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 ......阅读全文

应用ScanLater免疫印迹蛋白质梯估计蛋白质的分子量

  优点:   ·简单的一套的标准品就可以满足凝胶可视、膜定位和时间分辨荧光检测    ·蛋白质都已经被生物素标记    ·可以检测待测物的分子量    ·无需混匀和加热   简介   ScanLater免疫印迹蛋白质梯是ScanLater免疫印迹蛋白质检测系统必不可少的

应用ScanLater免疫印迹蛋白质梯估计蛋白质的分子量

优点:·简单的一套的标准品就可以满足凝胶可视、膜定位和时间分辨荧光检测 ·蛋白质都已经被生物素标记 ·可以检测待测物的分子量 ·无需混匀和加热 简介ScanLater免疫印迹蛋白质梯是ScanLater免疫印迹蛋白质检测系统必不可少的一项组成。蛋白质梯最初始是应用于蛋白质分子定量,凝胶电泳的可

抗原的免疫原性(一)

  抗原的免疫原性,首先决定于其自身的化学特性,但同一种抗原,对不同种动物或同种动物不同个体间其免疫原性强弱,可表现很大差异,因此一种抗原的免疫原性是由其化学性质和宿主因素决定的。具有免疫原性的物质称为免疫原(immunogen)。  一、免疫原性的化学基础  许多天然物质可诱导免疫应答,

单克隆抗体的制备(一)

材料1. 免疫原一旦作出制备单克隆抗体的决定后,首先要考虑的问题是使用何种免疫原(第2章)。免疫原(或抗原)可以有多种:全细胞、细胞提取物、纯化蛋白、融合蛋白、多肽、糖 类 、脂类或 D N A 等 。此外,制备单克隆抗体时不需要很纯或单一特异性的抗原,因为在单克隆抗体筛选的过程时,每个克隆

ELISA试剂盒的化学组成和结构

羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒大分子蛋白质,分子量大于10000者,可含有大量不同的抗原决定簇,是zui强的免疫原。如异种血清蛋白、酶蛋白及细菌毒等,是强免疫原蛋白质的例子。多糖是重要的天然抗原,纯化多糖或糖蛋白、脂蛋白以及糖脂蛋白等复合物中的糖分子部分都具有免疫原性。在自然界,许多微生物

ELISA试剂盒的化学组成和结构

荧光探针试剂盒大分子蛋白质,分子量大于10000者,可含有大量不同的抗原决定簇,是zui强的免疫原。如异种血清蛋白、酶蛋白及细菌毒等,是强免疫原蛋白质的例子。多糖是重要的天然抗原,纯化多糖或糖蛋白、脂蛋白以及糖脂蛋白等复合物中的糖分子部分都具有免疫原性。在自然界,许多微生物有富含多糖的荚膜或胞壁,细

全球竞相研发新冠病毒疫苗 或许还未研发出疫情就结束

  从美国到澳大利亚再回到中国,科学家们正利用新技术进行一项雄心勃勃的努力,不惜耗资数百万美元,以便在创纪录的时间内开发出一种疫苗,应对新冠病毒疫情。这种新病毒自去年年底在中国武汉出现以来迅速传播,致使数万人感染。  任何疫苗的研制通常都需要数年时间,这包括需要在动物身上进行试验、在人体上进行临床试

上海生科院重点实验室发表文章揭示血吸虫潜在药靶

中国科学家鉴定出了一组血吸虫蛋白质,它们能帮助这种寄生虫逃避宿主的免疫攻击。 科学家们希望,这一研究能为以血吸虫关键蛋白质为靶点的药物研究提供线索。 这项研究于今年7月发表在中国权威科学刊物《科学通报》上。 2006年,国家人类基因组南方研究中心的科学家已经完成了血吸虫蛋白质结构的鉴定工作。

蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立

TD-MSQS 2020 技术篇五蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立 学者简介:武利庆,研究员,中国计量科学研究院前沿计量科学中心蛋白质室主任杨屹,教授,北京化工大学化学学院苏萍,副教授,北京化工大学化学学院 近期,中国计量科学研究院武利庆及其合作者杨屹、苏萍等发表系列文章

蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立

TD-MSQS 2020 技术篇五蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立 学者简介:武利庆,研究员,中国计量科学研究院前沿计量科学中心蛋白质室主任杨屹,教授,北京化工大学化学学院苏萍,副教授,北京化工大学化学学院近期,中国计量科学研究院武利庆及其合作者杨屹、苏萍等发表系列文章(Anal.

利用肿瘤细胞的基因突变制备癌症疫苗

  个性化疫苗为治疗多对基因突变引发的癌症提供新的选择。  在一个小型临床试验中,利用在肿瘤细胞中的突变蛋白所制备的疫苗成功地引发了机体对癌细胞的免疫应答反应。  该结果是目前致力于研发个性化癌症治疗所得出的最新成果,并公布于4月2日的科学(Science)杂志中。在此次试验中,三位恶性黑色素瘤患者

国家重点基础研究发展计划09申报指南发布

  科技部基础研究司日前发布了《关于发布国家重点基础研究发展计划(含重大科学研究计划)2009年度项目申报指南的通知》。   国家重点基础研究发展计划是以国家重大需求为导向,对我国未来发展和科学技术进步具有战略性、前瞻性、全局性和带动性的基础研究发展计划,主要支持面向国家重大需求的基础研究领域和重

PNAS:治病抗生素有可能转而致病

   在每个基因密码的末端都包含着一条向翻译机器发送停止信号的信息。如囊性纤维化和杜氏肌营养不良等一些疾病,就是因为突变导致这一终止信号插入到必需基因的中间,促使生成截短蛋白所引起。一些抗生素可使得细胞的翻译机器无视这类终止密码子,由此被视作是这些疾病的一种潜在疗法而展开探索。然而发表在3月31

蛋白质研究国家重大科学研究计划项目在京启动

  ——“‘先天免疫相关蛋白质复合物结构与功能的研究’项目部署会在北京召开”        3月27日,蛋白质研究国家重大科学研究计划“先天免疫相关蛋白质复合物结构与功能的研究”项目部署会在北京召开。项目首席科学家清华大学柴继杰教

2018年生物领域获奖专题盘点

  2018年即将过去,年末为大家献上本年度生物领域获奖专题盘点,希望读者朋友们能够喜欢。1. “诺奖风向标”榜单揭晓 4名科学家荣获2018拉斯克奖  拉斯克奖是全球最为著名的医学类奖项之一,也有“诺贝尔风向标”之称。这是因为在诸多拉斯克奖得主中,已有87人获得了诺贝尔奖。2015年诺贝尔生理学或

诺贝尔生理学或医学奖:松开免疫系统的抗癌刹车

   在美国得克萨斯大学MD安德森癌症研究中心官网上,有几个黑体大字概括了新晋诺贝尔生理学或医学奖得主詹姆斯·艾利森对癌症治疗作出的贡献:“规则改变者”。  在日本京都大学官网上,可以看到今年另一名生理学或医学奖得主本庶佑的获奖感言:一开始以为只是“纯粹的基础性科学研究”,直到这带来切实疗法并听到患

新型基因疗法有望根治过敏

  澳大利亚科学家日前发明了一种基因疗法,成功治愈了实验鼠的哮喘,将来可望用于一劳永逸地治疗包括哮喘在内的各种过敏症状。  据当地媒体报道,澳大利亚昆士兰大学的一个免疫学研究小组开发的这种基因疗法,通过消除免疫细胞的“记忆”,使其不再攻击相关蛋白质,从而避免过敏。  免疫系统为生物机体抵御外来病原体

抗体的概念动物产生抗体的机理及单克隆抗体的制备方法

  抗体的概念    动物机体受到抗原物质的刺激后, 由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的, 能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白, 这类免疫球蛋白称为抗体(Antibody,简称 Ab)。   免疫球蛋白   免疫球蛋白(Immunogolobulin, 简称Ig) 是指存在于人和动物血液(

免疫印迹技术和免疫斑点技术

免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳与固相免疫结合,首先通过蛋白质电泳技术将需要区分的蛋白质转移至固相载体如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子质量,常用于检测多种病毒抗体或抗原。免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳

蛋白质免疫亲和活性浓度绝对测量方法的建立

近期,中国计量科学研究院武利庆及其合作者杨屹等发表系列文章(Anal.Bioanal.Chem.412(2020)2777-2784、Talanta178(2018)78-84、Microchem.J.157(2020)104954),介绍了基于表面等离子共振光谱法和数字ELISA的蛋白质免疫亲和活

抗原的抗原性(一)

  自发现抗体后,用血清学方法在体外实验,证明了天然抗原与其相应抗体发生特异性结合,这是一个重要的免疫学现象,称这种特性为抗原的抗原性。在早期由于尚未建立对蛋白质抗原进行分析的方法,为研究抗原性的化学本质造成了困难。奥地利免疫化学家Landsteiner在本世纪20年代创建了人工结合

检测自身免疫抗体的蛋白质芯片技术简介

  检测自身免疫抗体的蛋白质芯片技术   自身免疫性疾病是由异常免疫反应引起的慢性退行性或炎症性疾病。不同的自身免疫性疾病对机体的影响各有不同。例如,在多发性硬化症中,自身免疫反应的侵害对象是中枢神经系统,而在克罗恩病中则是肠道。此外,同种疾病对不同个体的组织和器官的影响程度不尽相同。   此类

免疫沉淀法浓缩蛋白质实验

实验方法原理 通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌,以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物,蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋

免疫沉淀法浓缩蛋白质实验

免疫沉淀法             实验方法原理 通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步

免疫沉淀法浓缩蛋白质实验

实验方法原理通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌,以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物,蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋白质

病毒或是人类进化的最强推手

  病毒听起来很吓人,但实际上,病毒与人类之间的协同进化,从人类起源开始,一直是紧密相连的。  病毒与人类宿主之间的持久斗争是人类演化的关键推动力,甚至于可以说,没有病毒,就不会有人类!  在大约6600万年前生命史上的第五次生物大灭绝中,恐龙以及许多物种都灭绝了。  但是有一类长得跟现在的鼩鼱差不

抗体的概念、动物产生抗体的机理及单克隆抗体...(二)

构成抗原的条件:一、异物性,又称为异质性或异源性正常情况下,自身组织或细胞对机体本身无免疫原性。而异种或异体物质,以及化学组成或结构发生改变的和由于某种因素而暴露的在胚胎期与免疫系统隔绝的自身物质则为良好的抗原。二、理化性状大分子物质抗原的免疫原性与其分子大小有直接关系:1、免疫原性良好的物质分子量

先天免疫相关蛋白质复合物结构与功能研究计划启动

  3月27日,蛋白质研究国家重大科学研究计划“先天免疫相关蛋白质复合物结构与功能的研究”项目部署会在北京召开。项目首席科学家清华大学柴继杰教授介绍了项目的总体情况、整体研究目标和课题间的相互衔接和依托关系,并就项目管理、经费使用、课题和单位间的协作互动等提出了具体要求,各课题负责人介绍了课题的准备

研究人员开发了一种新型“特洛伊木马”治疗多发性硬化症

  我们经常认为我们的免疫系统和神经系统是理所当然的。我们认为我们的免疫系统将保护我们免受疾病和病原体入侵我们的身体。同样地,我们假设我们的神经系统会从环境中获取信息,将其传递给我们的大脑,然后让我们的大脑移动肌肉。  但是当免疫系统认为你的神经系统是敌人并攻击你的身体时会发生什么呢?这种自身免疫反

技术和方案18 染色质免疫沉淀

试剂、试剂盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液免疫共沉淀洗脱液TESTE仪器、耗材超声波粉碎仪实验步骤1.培养要分析的细胞。每一个样品,需要在三角瓶中培养 50~100ml 细胞至 OD600 大约为 1。2.甲醛处理细胞交联蛋白质和 DNA。加甲醛到细胞中至终浓度为 1%(37% 的甲醛按 1