WIKI资讯
WIKI资讯
1．离心（Centrifuge）：高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。2．溶解（Reconstitution）：用去离子水或其它缓冲液（根据说明书要求进行选择）溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/ml)。溶解时不可振荡，避免因化学键的断裂造成蛋白失活，可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间，待细胞因子完全溶解后使用。溶剂的选择：1）要求用去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出；2) 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度。3．分装和贮存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液，稀释可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周，如需长期保存，在稀释液中加入10%的FCS（小牛或胎牛血清）或0.......阅读全文
不用创建一个胚胎，而将成体细胞还原为胚胎状态是一件棘手的事情。科学家们现已能重置一个成熟体细胞中的DNA，使该细胞能成长为人体内的任何细胞类型，如心脏肌肉细胞、神经细胞和膀胱细胞等。 一个病人到医院诊断病情，医生告知其诊断结果不太好，必须进行手术治疗。 于是，医生从病人的头上拔出一根
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
PCR引物决定PCR的特异性，引物的设计就显得尤为重要。下面以已知DNA序列设计引物为例介绍设计引物应考虑的几个方面：1、GC比值：众所周知,碱基对中的GC之间有三条氢键，AT之间有两条氢键，GC和AT在引物序列中的合理比例是设定PCR中退火温度的重要依据。通常在一个引物中GC和AT各半即可。2、长
从图片上部的两幅图的对比中可以看到，羊水细胞从外表看来与其它胚胎干细胞有很大区别；左下角的图片表示羊水细胞的iPS细胞可产出蛋白质的制造者之一“OCT4”；右下角的图片表示iPS细胞能够形成人体各种器官和组织的干细胞。 据国外媒体报道，德国柏林的科学家近日从人类胚胎的羊
五、亲代杆状病毒基因组的改进就像转移质粒的改进，对亲代杆状病毒基因组的改进也是为了满足各种不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重组杆状病毒载体构建和分离低效率的方法，这也是最初的杆状病毒-昆虫细胞系统存在的主要问题。现在已经知道这个问题的根源在于, 在共转染的昆虫细胞系中，转移质粒和亲代杆状病毒
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
二、目的基因和载体的连接获得目的基因后必须将其放在一定的载体内才能在宿主细胞内扩增或表达。目的基因与载体的连接及其后续的转化过程习惯上称为克隆（cloning）。由于目前很多基因都是利用PCR技术获得，因此这里先介绍PCR产物的克隆策略，然后再介绍其他的克隆方式。（一）PCR产物的克隆策略获得PCR
原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今
一、目的基因的获得 目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-
单细胞激光拉曼光谱检测重组大肠杆菌细胞表达甲酸脱氢酶摘要甲酸脱氢酶( FDH，EC1． 2． 1． 2) 在工业生产中有重要的应用价值，工业上应用的FDH 可以通过构建高水平表达重组FDH 蛋白的基因工程菌生产，用分子生物学的方法检测重组蛋白的高效表达和积累操作繁杂，耗时耗力且需要破碎细胞。为了寻找
英国爱丁堡大学近日发布新闻公报称，该校研究人员成功通过细胞重组技术，利用实验室培养的细胞培育出功能完全的胸腺。这是科学家首次利用体外细胞培育出完整的活体器官，对于开发新的疗法治疗免疫功能低下等疾病具有重要意义。 该项研究中，研究人员首先从小鼠胚胎中提取纤维母细胞，利用细胞重组技术将其转变成一种
基因打靶技术，是利用同源重组的方法，建立基因定点敲除细胞系或获得基因定点敲除动物。无论CRISPR/Cas还是TALEN,都是通过造成靶位点的双链断裂，诱导靶基因产生突变。而通过同源重组实现的DNA修复在G1期的细胞中是高度抑制的，以确保有丝分裂只发生在姐妹染色单体之间。因而只也是在DNA复制之
一、目的基因的获得目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-多聚酶链式
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
4月26日，国际学术期刊《Circulation》在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组的研究成果“Genetic Lineage Tracing of Non-myocyte Population by Dual Recombinases”。该研究工作利用新建立的双同源重组技术（
2019年11月26日，国际学术期刊Journal of Biological Chemistry 在线发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心/生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组的科研成果“Triple-cell lineage tracing by a dual reporter on a
减数分裂是有性生殖的必经过程。精子和卵细胞必须经过减数分裂才能产生。减数分裂过程要发生同源染色体配对、联会和重组等复杂的事件。交叉重组（crossover）是减数分裂的核心事件。交叉重组建立同源染色体之间的物理连接，保证染色体正确分离；同时会引起双亲遗传物质相互交换，增加物种的遗传多样性。如果交
第一节 转化基因片段在体外只是一段核酸分子，是化学物质，无法表现出遗传物质的生命活性。只有当其存在于活细胞后，生命的特征才能充分展示出来。在分子克隆实践中，在体外操作的核酸分子只有进入细胞以后才能达到克隆的目的。一、重组DNA分子转入原核生物细胞1. 重组质粒DNA分子转化大肠杆菌转化（transf
科学家有望摆脱对卵子和晶胚的依赖，干细胞个体治疗获得希望 由于胚胎干细胞可以发展成任何种类的身体组织，因此一直受到科学家的高度重视。最近，三个独立的科研小组的研究成果表明，对正常小鼠细胞进行基因重组改造，能够成功制造出“胚胎干细胞”，几乎与源于晶胚的胚胎干细胞没有区别。这一技术有望使科学家摆脱了对
策略4 Tnnt2-Dre;Actb-Cre;NR1 通过NR1系统研究非肌细胞向肌细胞的转化虽然利用广泛型启动子驱动的可诱导Cre或Dre可以有效标记大多数非肌细胞，但实际上标记效率并未达到100％。少数未标记的非肌细胞在损伤后在成体心脏中产生新的肌细胞也仍旧是有可能的，虽然可能性并不大，因为在谱
2011年在我们还不是十分熟悉它的名字的时候，它被评为了当年Nature Methods杂志的年度技术，2012年在这种技术已成功应用于人类体外培养细胞、酵母、线虫、斑马鱼、植物、大小鼠等多个领域之后，它又入选了Science十大科学突破。这就是TALEN (Transcription
据美国物理学家组织网4月25日报道，美国戴维·格拉斯通研究所的科学家丁盛（音译）报告称，他通过细胞重组技术，对现有的诱导多功能干细胞(iPS细胞)技术进行改进，将成人皮肤细胞直接转化成了神经干细胞，新方法在再生医学领域具有重要的应用潜力。相关研究发表于4月25日出版的《美国国家科学
第七节 实验动物的处死当实验中途停止或结束时，实验者应站在实验动物的立场上以人道的原则去处置动物，原则上不给实验动物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安乐死。安乐死是指实验动物在没有痛苦感觉的情况下死去。实验动物安乐死方法的选择取决于动物的种类与研究的课题。一、蛙 类常用金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓的
三、实验动物的准备本文主要叙述制备转基因鼠的实验程序。(一)不育雄性公鼠:结扎公鼠与母鼠交配以后产生假孕母鼠。受结扎的公鼠需8周以上，对种系无特殊要求。在正式实验前，结扎公鼠需与性成熟的雌性小鼠交配，反复交配两次或三次，经检查雌体有阴道栓，但均不怀孕产仔，则证明结扎成功。结扎公鼠使母鼠产生阴道栓的能
近日，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组的科研成果，以Enhancing the precision of genetic lineage tracing using dual recombinases为题，在线发表在Nature Medicine上。该研究将Dre
重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及
实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或
DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组DNA技术。DNA克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的DNA片段的获得、载体的选择、各种工具酶的
5月15日，中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组在国际学术期刊Circulation Research上发表了题为“Genetic Targeting of Organ-Specific Blood Vessels”的最新研究成果。该项工作建立一套新的遗传操作系统以实现更加精确的遗传靶
5月15日，中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组在国际学术期刊Circulation Research上发表了题为“Genetic Targeting of Organ-Specific Blood Vessels”的最新研究成果。该项工作建立一套新的遗传操作系统以实现更加精确的遗传靶