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链亲和素生物素结合物免疫荧光标记实验

实验材料 组织样品试剂、试剂盒 生物素荧光染料链亲和素仪器、耗材 离心机摇床实验步骤 1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2. 待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。 3. 稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 μl 抗体,应能盖住切片)。 4. 用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。5. 以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。6. 稀释的生物素酰化第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片用40~50......阅读全文

专访颜光涛:标记免疫技术发展从标准制订开始

   2015年12月11日,在中国分析测试协会第七届理事会上,通过了拟成立“中国分析测试协会标记免疫分析技术专业委员会”(以下简称“标免专业委员会”)的申请,这项基于标记免疫分析技术的生命科学分析技术,不仅是对中国分析测试协会现有的在化学基础上的分析测试技术的一个补充,更适时为

生物素-亲和素系统介绍

生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应,使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。BAS目前已广泛用于抗原、抗体的定性、定量检测及定位观察研究。生物素(biotin,B)

ELISA技术综述

  ELISA原理   ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELI

酶免疫分析技术进展与自动化

郝繁运   综述 中国误诊学杂志  2007年 第一期  第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编 摘要:本文主要介绍了酶免疫分析的发展现状,从酶免疫分析标记技术若干环节的技术进步、在方法学上与现代化技术的融合与发展、酶免疫分析技

IHC-石蜡技术

实验概要免疫组织化学  (IHC) 是确定组织切片上是否存在蛋白及其位置的一种方法。尽管这种方法在定量分析时灵敏度较免疫印迹法或 ELISA  等免疫测定方法低,但它能了解整个组织的情况。适用于癌症等疾病发展及治疗情况的评估。因此,从 IHC 获得的信  息结合显微技术

IHC/ICC/IF实验前需要知道的几个要点~!

  IHC/ICC/IF ,傻傻分不清楚?它们都是用于定位检测抗原表达的免疫检测技术,由于技术相对简单且直观,在科研和临床上都得到了大量使用。但是影响最终检测效果的变量非常多;每一个具体的检测都会遇到多个需要调整的变量。具体到选择何种方法来保存组织样本;固定标本该用醇还是醛;如何选择最合适的一抗;抗

IHC/ICC/IF实验前需要知道的几个要点

IHC/ICC/IF ,傻傻分不清楚?它们都是用于定位检测抗原表达的免疫检测技术,由于技术相对简单且直观,在科研和临床上都得到了大量使用。但是影响最终检测效果的变量非常多;每一个具体的检测都会遇到多个需要调整的变量。具体到选择何种方法来保存组织样本;固定标本该用醇还是醛;如何选择最合适的一抗;抗原修

IHC-石蜡技术

实验概要免疫组织化学  (IHC) 是确定组织切片上是否存在蛋白及其位置的一种方法。尽管这种方法在定量分析时灵敏度较免疫印迹法或 ELISA  等免疫测定方法低,但它能了解整个组织的情况。适用于癌症等疾病发展及治疗情况的评估。因此,从 IHC 获得的信  息结合显微技术

免疫组织化学常用的检测方法

  免疫组织化学(immunohistochemistry)技术的基本原理是抗原-抗体的反应。利用带有标记物(如荧光素或辣根过氧化物酶等)的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学

常见发光免疫分析技术的比较

发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。70年代末以来得到了迅速发展,目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品,基本上可以分为:化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。   &n

常见发光免疫分析技术的比较

免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高,一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害),而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定,最终趋向于能够检测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定

肿瘤细胞的荧光免疫表型和 FISH 共分析实验

实验材料 正常鼠血清鼠单克隆抗地髙辛抗体鼠抗 FITC 抗体AMCA-亲和素FITC-亲和素生物素化山羊抗亲和素抗体Cy3 标记的亲和素Cy3 标记的山羊抗鼠抗体Cy3 标记的兔抗山羊抗体Cy3 标记的驴抗兔抗体Cy3 标记的兔抗鼠抗体 地高辛标记的山羊抗鼠抗FITC 标记的驴抗鼠抗体FIT

ELISA实验所用试剂详解

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制

肿瘤细胞的荧光免疫表型和 FISH 共分析实验

            实验材料 正常鼠血清 鼠单克隆抗地髙辛抗体 鼠抗 FITC 抗体 AMCA-亲和素 FITC-亲和素

时间分辨荧光免疫分析技术在食品安全领域的应用

随着分析方法的飞速发展,无论是食品中有毒有害物质,还是环境中痕量元素的检测,或者生物体内功能因子的分析,都迫切需要一种灵敏度高、快速准确、性能稳定的痕量分析方法。时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolved fluoroimmunoassay,简称为TRFIA)是20世纪80 年代中期发展起

免疫PCR[Im-PCR, Immuno PCR]基本原理、试验程序和操作方法-4

3 PCR产物的检测与定量技术 1)凝胶检测系统 用凝胶扫描仪或计算机辅助视频设备对溴化乙锭染色的琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶进行定量,放射性标记的扩增产物可通过放射自显影定量测定,最近用自动DNA 测序仪检测荧光标记的核酸,这种方法可准确测量扩增产物的大小,而且其检测灵敏度达fg水平,

细胞化学技术-2

二、 免疫细胞化学技术 免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗原抗体特异结合的特性定位组织和细胞中特异大分子的一类技术。它包括光镜水平(简称免疫组化)和电镜水平(简称免疫电镜)的免疫细胞化学技术。应用免疫细胞化学技术可在原位检测细胞的各种大分子,

链亲和素-生物素结合物免疫荧光标记实验

免疫荧光标记是微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法,在临床上得到了广泛的应用。实验方法原理免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光

免疫PCR

免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针,用此探针与待测抗原反应,PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子,电泳定性,根据特异性PCR产物的有无,来判断待测

肿瘤细胞的荧光免疫表型和 FISH 共分析实验

染色体畸变通常在大多数血液肿瘤和各种实体瘤中检测到,在临床病理上,经常与判定肿瘤的直接形态和免疫表型特征有关。染色体畸变的检测为逐条诊断和肿瘤遗传分类奠定了基础。尤其在白血病和淋巴瘤中,许多主要的染色体畸变与疾病的临床分期有关。另外,在肿瘤预后过程中,还将发生其他染色体的畸变。因此,细胞遗传学结果对

免疫组化试验抗体选择及常用染色方法

一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性

免疫组化实验原理和步骤

  实验原理:   抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原

食品安全快速检测技术你知多少?

快速检测技术广泛用于食品安全快速检测,临床检验、检验检疫、毒品检验等公共领域。食品安全快速检测是指对食品利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式。    1、食品安全问题主要有害污染物    (1)农药,化肥:有机磷,有机氯,硝酸盐 

应用ScanLater免疫印迹蛋白质梯估计蛋白质的分子量

  优点:   ·简单的一套的标准品就可以满足凝胶可视、膜定位和时间分辨荧光检测    ·蛋白质都已经被生物素标记    ·可以检测待测物的分子量    ·无需混匀和加热   简介   ScanLater免疫印迹蛋白质梯是ScanLater免疫印迹蛋白质检测系统必不可少的

免疫组化技术全程原理剖析以及案例解答

1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞

应用ScanLater免疫印迹蛋白质梯估计蛋白质的分子量

优点:·简单的一套的标准品就可以满足凝胶可视、膜定位和时间分辨荧光检测 ·蛋白质都已经被生物素标记 ·可以检测待测物的分子量 ·无需混匀和加热 简介ScanLater免疫印迹蛋白质梯是ScanLater免疫印迹蛋白质检测系统必不可少的一项组成。蛋白质梯最初始是应用于蛋白质分子定量,凝胶电泳的可

细菌学诊断新技术

 随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学的不断发展,新的细菌诊断技术和方法已广泛用于食品微生物的鉴别。传统的细菌分离、培养及生化反应,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。近年来国内外学者不断努力,已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的细菌学诊断方法

适用于TR-FRET的荧光染料:trFluor 链霉亲和素

时间分辨荧光:理论上,荧光是最灵敏的检测手段,由于许多分子间和分子内的变化会改变标记物的荧光发射。因此,很早就把它作为均相分析技术可能的新的手段。而现在偏振,淬灭,时间关联,荧光寿命改变以及荧光共振能量转移(FRET)已经被广泛应用在对分子间作用的研究中。在生物溶液或血清中的很多化合物和蛋白质是自发

原位杂交组织化学杂交体检测

   杂交体检测又称杂交体显示,是指通过一定方法使杂交反应形成的杂交体(杂交信号)成为在显微镜下可识别的产物。对原位杂交反应信号进行显示的方法因探针标记物不同而异。    (一)放射性核素标记探针的检测    *个原位杂

引物修饰的常见类型及应用

  脱氧次黄嘌呤(deoxyInosine,dI):    脱氧次黄嘌呤是一个自然存在的碱基, 虽然不是真正意义上的通用碱基但当与其它碱基结合时会比其它碱基错配相对更稳定。 脱氧次黄嘌呤与其它碱基的结合能力为dI:dC > dI:dA > dI:dG > dI:dT. 在DNA聚合酶的催化下,脱氧