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SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。 2.Taqman探针： 也称为水解寡核苷酸探针。该探针在5’端标记报告荧光基团，在3’端标记淬灭荧光基团，在探针完整时报告荧光基团发出的荧光被淬灭荧光基团吸收，因此没有荧光产生。在延伸阶段，由于DNA聚合酶具有5’－3’外切酶活性，5’端标记报告荧光基团被水解掉，远离淬灭荧光基团，于是产生荧光信号。Taqman探针的优点是可以利用多种荧光同时进行多重分析，这是SYBR等DNA结合荧光基团所不具备的优点。 3.分子信标（molecular beacons）： 为一发夹结构，环区与目的片段特异性互补，茎区的5’端和3’端分别标有荧光基团和淬灭基团。......阅读全文
实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量
多聚集链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、
正在着手做 real-time PCR 的朋友们，我想最开始肯定要考虑引物设计的问题。看完下面的文字，我保证你得到想要的引物设计方法和引物序列。第一步：拿到你所要研究的基因的序列。不要告诉我你不会找序列。如果真的不会，请参考丁香园内其他版块，如NCBI使用，序列查找等。第二步：确
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析，分析的都是PCR终产物。但是在许多
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为10
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为10
(张蓓，沈立松 上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心实验诊断中心)摘要:多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具，实时荧光定量PCR(real-timequantitative PCR)技术以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又
何谓PCR,简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制.目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。 PCR的要素基本的PCR须具备１.要被复制的DNA模板 Template ２
PCR技术简介 前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reacti
相关专题1 甲基化敏感性限制性内切酶 (methylation-sensitive restriction Endonuclease，MS-RE)-PCR/Southern法这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶 对甲基化区的不切割的特性，将DNA消化为不同大小的片段后再进行分析。常使用的甲基化敏感的
测序技术的引入促使miRNA研究领域进入快速发展阶段，然而qPCR仍是验证测序数据的重要标准。本文将为您介绍使用qPCR进行miRNA分析的基本要点，希望能帮助新人快速入门。什么是miRNA？miRNA是一类小的非编码RNA，能够与RNA诱导沉默复合物（RISC）结合，通过作用于mRNA，进而介导转
（二）反应液污染 可采用下列方法之一处理：1. DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30 min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染
前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Po
聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具[1]。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系
荧光定量PCR简介 荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间，而其应用一直都没广泛展开，究其原因，无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期，尤其是08年以来，仪器和试剂是遍地开花，这也使科研人员均跃跃欲试，都想借此技术使自己的研究能突飞猛进，发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据
荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 （ 如药物处理、物理
3.3 SYBR@Green 法SYBR@Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料，与双链DNA结合后，其荧光大大增强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。SYBR@Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中，加入过量SYBR@Gre
多聚集链反应（polymerasechainreaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-timequantitativePCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全
本文比较分析了国内外李斯特菌的检测方法、不同标准限量值的差异。介绍了国内外李斯特菌快速检测技术的应用及存在的问题，对我国微生物快速检测的现状进行了概述，探讨了李斯特菌快速检测技术的未来发展方向，对李斯特菌检验方法探索及快速检测技术的发展具有一定的借鉴意义。 李斯特菌(Listeria
所谓Real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在real-time技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现，它能降解
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400
Real Time PCR实时荧光定量PCR 其定量的基本原理是在 PCR 反应体系中加入非特异性的荧光染料（如： SYBR GREEN I ）或特异性的荧光探针（如： Taqman 探针），实时检测荧光量的变化，获得不同样品达到一定的荧光信号（阈值）时所
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。 1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。 1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-coli D
Real-time PCR实验注意事项实验中的一些好习惯加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到zui大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是zui快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好
随着人类基因组计划（human genome project ）在2003年顺利完成，基因组测序技术取得了长足的进步，这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊，这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以
随着人类基因组计划（human genome project ）在2003年顺利完成，基因组测序技术取得了长足的进步，这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊，这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以