免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗...1
制备荧光抗体是免疫荧光组织化学的重要技术之一，制备特异性强和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高效价的抗体。 一、荧光素 荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光，停止能量供给，发光也瞬时停止。可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光素。目前主要常用于标记抗体的荧光素如下： 1、异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC） FITC是一种呈黄色粉末状，性质稳定，在室温下能保存2年以上，在低温中可保存多年，易溶于水和酒精。最大吸收光谱为490~495nm，最大发射光谱为520~530nm，呈现黄绿色荧光，分子量为389.4。在碱性条件下，FITC的异硫氰酸基在水溶液中与免疫球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键结合，成为标记荧光免疫球蛋白，即荧光抗体。一个IgG分子上最多能标记15~20个FITC分子。 2、四甲基异硫氰酸罗达明（......阅读全文
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制备荧光抗体是免疫荧光组织化学的重要技术之一，制备特异性强和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高效价的抗体。 一、荧光素 荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光，停止能量供给，发光也瞬时停止。可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光素。目前主要常用于标记抗体的荧光素如下： 1、异硫氰酸
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗...2
免疫荧光组织（细胞）化学技术——荧光素及其标记抗体的方法 2P3（2）Chadwick氏法 试剂和材料：抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、0.01 mol/L pH8.0磷酸盐缓冲盐水、1%硫柳汞、离心机及离心管、三角烧瓶(25 ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500 ml
免疫荧光组织（细胞）化学技术基本原理
免疫荧光组织化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，荧光素受激发光的照射，由低能态进入高能态，而高能态的电子是不稳定的，以辐射光量子的形式释放能量后，
免疫荧光组织（细胞）化学技术：如何设置对照（直接...
免疫荧光组织（细胞）化学技术：如何设置对照（直接法、间接法为了保证免疫荧光组织化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次试验时设置对照： 1、直接法 （1）标本自发荧光对照 标本只加PBS或缓冲甘油封片，荧光显微镜观察组织内如果有荧光，称为自发荧光。 （2）抑制试验 可分为一
免疫荧光细胞化学技术
免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons等（1950）建立，经过近43年的发展，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与亲合化学技术如葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激
免疫荧光组织（细胞）化学技术：荧光抗体的质量控制
1、染色特异性和敏感性的测定方法 （1）特异性染色和效价测定 直接染色法中效价以倍比稀释如1：2、1：4、1：8……，与相应抗原标本作一系列染色，荧光强度在“+++”的最大稀释度，为其染色滴度（效价）或单位。实际染色时，可取低一个或两个稀释度（即2~4个单位），如染色效价为1：64，实际应用时可取1
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
一、其它荧光抗体染色方法1、膜抗原荧光抗体染色法本法应用直接法或间接法的原理和步骤，可对活细胞在试管内进行染色，常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究，阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。2、双重染色法在同一标本上有两个抗原需要同时显示（如A抗原和B抗原），A抗原的
免疫荧光组织（细胞）化学技术发展简史和概述
一、免疫荧光组织（细胞）化学技术的发展简史免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激光技
免疫荧光细胞化学染色方法1
一、标本制作可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。 二、荧光抗体染色方法 （一）直接法 1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），
免疫荧光细胞化学技术3
四、荧光图像的记录方法 荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上可靠的。随着技术科学的发展，在不同程度上采用客观指标记录判断结果，如用细胞分光光度计，图像
免疫荧光细胞化学技术2
四、荧光抗体的保存 以0～4℃或-20℃低温保存，防止抗体活性降低和蛋白变性。最好加入浓度为1：5000～10000的硫柳汞或1：1000～5000的叠氮钠防腐，小量分装如0.1～1ml，真空干燥后更易长期保存。[NextPage] 第三节 免疫荧光细胞化学染色方法 一、标本制作 可制作涂片
免疫荧光组织（细胞）化学的操作流程
一、原理与意义免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——直接法，是一种荧光抗体染色法。该方法比较简单，适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白质抗原如肾、皮肤的检查和研究。此法每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原，特异性高而敏感性较低。二、操作流程1、染色：切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或
病毒免疫荧光实验_荧光素标记抗体
实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光标记抗体方法有直接标记法和间接标记法两种。(1) 直接法：较为常用，具体步骤是：1) 抗体溶液的制备：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 将待标记抗体稀释至 20mg/ml;2) 荧光素：根据待标记抗体的总量，按 0.01mg 荧光素/mg 蛋白
－免疫组织化学法实验——悬浮细胞的免疫荧光标记
实验材料细胞生长于含培养液的15 mL Falcon管中试剂、试剂盒PBSPFA固定液仪器、耗材多聚L-赖氨酸包被的载玻片实验步骤1) 细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机在4℃以800 g离心5 min (用于淋巴细胞）。吸去培养液并以4℃的PBS重悬细胞。离心机转速依细胞类型进行调整，但必须低转速
免疫荧光组织（细胞）化学技术系列一：发展简史和概述
一、免疫荧光组织（细胞）化学技术的发展简史免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞（或组织）化学。它与葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素与卵白素、植物血凝素（ConA等）相结合拓宽了领域；与激光技
免疫荧光标记技术
．原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法：将标记
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：间接法
一、原理与意义 免疫荧光组织（细胞）化学染色方法——间接法，是一种荧光抗体染色法。该方法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原，敏感性较高，操作方法较易掌握，而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体（如麻疹）等的研究和检查，所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。 二、操作流程 （一）双层法
免疫组织化学法实验——组织切片的免疫荧光标记
实验材料组织样本冰冻切片置于载玻片上试剂、试剂盒PBS第一抗体5〜10μg mL第二抗体特异性针对第一抗体的抗体突光染料结合物封片介质（如Gelvatol)仪器、耗材塑料玻片盒或加湿盒实验步骤1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片，交叉放入玻片盒（每边约6片
免疫组织化学法实验——单层生长细胞的免疫荧光标记
实验材料在3〜5 cm培养皿上生长的单层细胞（培养皿越小所需的抗体就越少 但培养皿应适合显微镜下观察）试剂、试剂盒VPBS40℃2% (m V)高聚甲醛（PFA)固定液 4℃ 用于细胞表面抗原固定100%甲醇 -10〜-20℃ (置于冰箱的结冻室冷却较为理想）；或含0.1% (V V) Triton
免疫荧光标记为什么不直接标记一抗而标记二抗
因为一种一抗只识别一种底物，如果每种一抗都需要荧光标记，那这样成本很高。而二抗既可以和一抗结合，又带有可以被检测出的标记（如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗，提高了通用性。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体，即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。一抗二抗都是一种可以特异结
LSCM冷冻组织切片的免疫荧光标记
冷冻组织切片的免疫荧光标记 将冷冻组织切片从 -80℃ 冰箱中取出，室温放置 10 min，待切片回温并干燥，浸于 PBS 中 10 min洗去OCT，可以无需 Triton 处理，即可进行免疫荧光抗体标记，操作步骤与培养细胞反应方法相同。反应在避光湿盒中进行，反应结束时用无荧光封固剂封片，4℃保存
组织切片的免疫荧光标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 PBS抗体仪器、耗材 玻片加湿盒实验步骤 1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。 2. 待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。 3. 稀释的第
组织切片的免疫荧光双标记实验
间接免疫荧光显微镜检术可使两种或更多种抗原可以在同一切片，同一时间内被显示出来，可用于（1）细胞标记；（2）免疫荧光筛选干细胞。实验方法原理通过使用激发波长及发射波长均不相间的荧光染料而进行的。通常限用两种荧光染料，最常见的是罗丹明（绿光激发，发射红光）和荧光素（蓝光激发、发绿光）联合使用。实验材料
组织切片的免疫荧光双标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 第一抗体IgG实验步骤 1. 当进行双标记实验时，最重要的准则是：第一抗体应为不同类型，从而使第二抗体能分别识别之。第一抗体最好是来源于不同免疫动物。但如使用单克隆抗体，这一要求就有可能达不到，当使用单抗时，不同型的抗体如IgG和IgM，可被第二抗体确切区分
组织切片的免疫荧光标记实验
实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。实验材料组织样品试剂、试剂盒PB
荧光素标记抗体技术
(一) 原理 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力
免疫荧光标记技术的原理
免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。
免疫荧光标记技术是什么
．原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法：将标记