细胞增殖检测:CFSE原理和CFSE配制

一、原理 荧光染料CFSE, 也可称为CFDA SE(5,6- carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester) 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂,是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团,这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时,不具有荧光性质,而具有细胞膜通透性,能够自由进入细胞;而当其扩散进入细胞内环境,内源的酯酶可将其乙酸基团水解,此种形式的CFSE分子具有很高的荧光活性,被激发能够产生绿色荧光,却不再具有膜通透性;同时,其含有的succinimidyl ester基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应,最终形成具有荧光的蛋白加合物。因此,当细胞进行分裂增殖时,具有荧光的胞质蛋......阅读全文

细胞增殖检测:CFSE原理和CFSE配制

一、原理 荧光染料CFSE, 也可称为CFDA SE(5,6- carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester) 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂,是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧

采用细胞内荧光染料CFSE检测淋巴细胞的迁移和增殖

基 本 方 案 淋 巴 细 胞 的 CFSE 标记材 料(带 V 项 目 见 附 录 1)实验动物,人外周血或者培养的淋巴细胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 盐 溶 液(H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 热 灭 活 F B S 的 P B S5m m

采用细胞内荧光染料CFSE检测淋巴细胞的迁移和增殖

实验步骤基 本 方 案 淋 巴 细 胞 的 CFSE 标记材 料(带 V 项 目 见 附 录 1)实验动物,人外周血或者培养的淋巴细胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 盐 溶 液(H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 热 灭 活 F B S 的 P B S

使用CytoFLEX流式细胞仪+荧光染料CFSE检测细胞增殖

荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。其基本原理如下:CFSE能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强

靶细胞杀伤实验:CFSE/PI法

做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。 1、计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2u

靶细胞杀伤实验:CFSE/PI法

做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。1、计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM,37度30分钟

荧光染料CFSE活细胞标记的特点

荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。其基本原理如下:CFSE能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强

荧光染料CFSE活细胞标记的特点

荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。其基本原理如下:CFSE能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强

CellTrace™-CFSE-Cell-Proliferation-Kit

实验概要The CellTrace™  CFSE Cell Proliferation Kit provides a versatile and well-retained  cell-tracing reagent in a convenient and easy-to-use form. The

荧光染料增殖实验

CFSE检测法CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有细胞膜通透性,能够自由进入细胞;当CFSE扩散穿过细胞膜,会与细胞内源酯酶产生水解反应而被激发,发出绿色荧光,这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合,形成稳定的胞内荧光蛋白。每当细胞进行分裂增殖,胞内荧光蛋白会被平均分配到下一代细胞中,

细胞增殖检测方法

一、胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法 胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的碱基,也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程,通过测定细胞的放射性强度,可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。 二、MTT检测法 MTT检

-2012CFSE食品安全在行动

  食品安全是事关公众健康、社会经济稳定和全球贸易的重大问题,因此,食品保护是一个全球范围的重大问题,也是一个可以通过对话、协作和知识共享而得到极大改进的问题。作为年度性会议,“第六届中国食品安全控制及检测仪器设备展览会”(简称CFSE China 2012)都为食品产业链的参与者提供了一个无与伦比

多种细胞快速检测的方法(二)

荧光染料增殖试验 CFSE检测法CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有细胞膜通透性,能够自由进入细胞;当CFSE扩散穿过细胞膜,会与细胞内源酯酶产生水解反应而被激发,发出绿色荧光,这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合,形成稳定的胞内荧光蛋白。每当细胞进行分裂增殖,胞内荧光蛋白会被平均分

检测细胞增殖的种类以及方法步骤

目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法,通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法,即细胞活力(cellviability)检测方法,通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然,细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在

检测细胞增殖的种类以及方法步骤

目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法,通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法,即细胞活力(cell viability)检测方法,通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然,细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞

细胞生物学实验中细胞增殖的检测方法

1.检测细胞代谢活性检测细胞的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中乳酸脱氢酶的活性会增加,而活性的脱氢酶可以使得外源性的四唑盐或者阿尔玛蓝(Alamar blue)还原成为带有颜色还原产物。通过分光光度计或者酶标仪来读取含染料培养基的吸光度,从而衡量细胞的代谢活性,检测细胞增殖的情

如何选择最亮的荧光染料荧光染料亮度排行汇总(一)

       荧光染料是细胞生物学等科学研究中不可或缺的重要工具,荧光滤色块是荧光显微镜中至关重要的一个部件。我们大家在操作荧光染料亮度的时候,我们可以按照上面的比较方法去比较荧光染料的亮度,那么一般荧光染料亮度怎么进行比较?        荧光染料的亮度可以用来比较不同荧光染料的荧光标记效果,通过

法测效靶细胞杀伤——用流式细胞术

做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,国外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。 具体参照如下:1、计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM,

流式细胞术测效靶细胞杀伤实验

做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确,这也是偶参照老外的方法吧。1 计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度

BrdU检测丁细胞和B细胞增殖

基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液(口 服用)或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液(注射用)P B S , p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D N A

第六届中国国际CFSE-2012举办时间变更通知

   CFSE 2012第六届中国国际食品安全控制及检测仪器设备展览会举办时间变更通知。

细胞增殖检测

细胞增殖检测:3H同位素渗入法实例             实验方法原理 树突状细胞(DC) 是一组分布广泛的、由骨髓来源的、具有迁移能力的免疫细胞。体外培养的细胞分化能力并为完全丧

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细胞增殖检测:3H同位素渗入法实例             实验方法原理 树突状细胞(DC) 是一组分布广泛的、由骨髓来源的、具有迁移能力的免疫细胞。体外培养的细胞分化能力并为完全丧

BrdU标记法检测细胞增殖的原理

细胞增殖能力是测定物质毒性、评估药物安全、评价细胞活力的重要指标之一,被广泛应用于分子生物学、肿瘤生物学、免疫学和大规模药物筛选等研究领域。目前检测细胞增殖能力的方法主要分为两类:一类是直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞增殖能力,如Ki67、BrdU以及EdU细胞增殖检测等;一类是通过测定活性细胞数

检测细胞增殖需要使用的仪器与试剂清单

细胞增殖可以通过测量诸如新合成的DNA、总核酸含量或细胞分裂等参数来确定(见表1)。 最简单的方法是使用可与胺反应的细胞跟踪指示剂(例如CytoTell 染料)监视细胞分裂,这些可渗透细胞的指示剂与细胞质蛋白共价结合。由于这种共价偶联反应,CytoTell 染料无法转移到相邻细胞中,并且

流式检测-T-细胞增殖的技巧有哪些?

集中于 T 细胞的许多基础和临床免疫研究包括增殖测定,都是为了确定 T 细胞是否能够在不同的体外或体内条件下增殖。流式细胞仪术是测量 T 细胞增殖的理想方法,现在有一套染色产品,可以在现有的流式细胞仪染色板中加入增殖染料。与所有流式细胞术染色步骤一样,一定要做一个预实验确定染色试剂的用量和确定采

细胞增殖检测:3HTdR渗入法原理和操作步骤

一、原理 T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有

岛津、日立将亮相11月份CFSE2013上海食品安全展

  CFSE2013引领行业发展趋势,集中展示涵盖食品安全与生物技术、微生物与生命科学、检测分析与控制、追溯技术四大板块的全方位产品内容是不容错过的业内展会。展会致力于推动业界各分支领域的创新与商业发展,汇聚来自世界各地科研及食领域的专家学者,是提升市场竞争力及寻找创新解决方案的绝佳平台   C

细胞增殖检测:BrdU

5-brdu 的分子量为307.1,将100mg分为三份30.7mg(0.1mmol),溶于1ml三蒸水,分装-20度保存。用的时候再稀释100倍,如在1ml 溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量,如100ul,避免反复冻融使其活性降低。 1、BudR贮存液的配制 BudR 5mg(先用0.5m

促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法

(一)放射性核素掺入法:通过细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。该法的优点是结果客观,可常规用于大标本量的测定,但方法的特异性受依赖细胞株依赖程度的影响。此外,测定过程中需要使用放射性核素,废物的处理较繁琐。(二)MTT比色法:不使用放射性核素,以细胞代谢变化作为增殖指征来检测细胞因子生