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酶细胞化学技术的概念

将细胞内的酶与底物相互作用, 再将酶反应的产物作为反应物质,在酶的作用部位进行捕捉,使其在显微镜下具有可见性。这种在酶作用下产生反应产物, 经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。......阅读全文

酶细胞化学技术的概念

将细胞内的酶与底物相互作用, 再将酶反应的产物作为反应物质,在酶的作用部位进行捕捉,使其在显微镜下具有可见性。这种在酶作用下产生反应产物, 经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。

免疫酶细胞化学实验技术

免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)中最常用的方法之一,它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下,借助于酶细胞化学的手段,检测某种物质(抗原/抗体)在组织细胞内存在部位的一门新技术:即预先将抗体与酶连结,再使其与组织内特异抗原反应,经细胞化学染色

细胞化学加帽的概念介绍

加帽是在催化剂N-甲基咪唑(NMI)的催化下,通过脱水乙酸酐对5’羟基的乙酰化完成。当合成完成时,寡核苷酸通过琥珀酸酯仍连于固相载体上,碱基的环外基团仍携有保护基团。RNA三磷酸酶首先从前体mRNA的5‘端移去一个磷酸;之后鸟苷酸转移酶加上一个鸟嘌呤核苷酸以形成5’-5‘键;最后,甲基转移酶在鸟嘌呤

细胞化学加尾的概念介绍

加尾并非加在转录终止的3’末端,而是在转录产物的3’末端,由一个特异性酶识别切点上游方向13~20碱基的加尾识别信号AAUAAA以及切点下游的保守顺序GUGUGUG,把切点下游的一段切除,然后再由Poly(A)聚合酶催化,加上Poly(A)尾巴,如果这一识别信号发生突变,则切除作用和多聚腺苷酸化作用

细胞化学基础--亲脂性的概念

亲脂性是指一个化合物融解在脂肪、油、脂质或非极性溶剂的能力。这些非极性溶剂本身就亲脂,所以这告诉我们"喜欢什么就溶于什么"。因此亲脂性的物质就会溶在亲脂的溶剂,亲水性的物质就会溶于亲水性的溶剂内。当我们以伦敦力的角度来看,亲脂性、疏水性和非极性可以互相替换,然而,亲脂性和疏水性并不是同义字,我们可以

免疫酶细胞化学实验技术-4

三、ICC在细胞功能研究中的应用  形态学研究目的之一是揭示组织细胞结构特征及其功能意义。利用ICC显示给与细胞增殖标记物,是组织细胞学研究中形态和功能相结合的重要手段之一。目前常用的细胞增殖标记物有4种,Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase

免疫酶细胞化学实验技术-3

一、对照实验  1.吸收实验  应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时,需用相应的抗原吸收抗血清后,再孵育标本,判断结果的可信性(结果应为阴性)。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种(见本书第一章 ),对于不能形成沉淀,难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原,以固相吸收为佳

免疫酶细胞化学实验技术-2

 (四)染色原理及步骤  1.基本原理  酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同,亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上,间接法是将酶标记在第二抗体上,检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体(80%~90%的抗血清系由家兔制得,而绝大数单克隆

酶细胞化学技术的实验方法介绍

样品制备酶细胞化学的一个重要问题是既要保存好细胞内酶的活性,又要保存好细胞的结构,因此选择适当的固定剂种类、浓度、固定的方式和时间是细胞化学技术的一个关键问题。光镜样品固定多选用中性福尔马林或多聚甲醛,4℃、24小时,常规的石蜡包埋切片可以满足相当一部分酶的细胞化学要求;电镜样品固定通常用0.5~2

化学发光酶免疫分析的概念介绍

化学发光酶免疫分析(Chemiluminescent enzymeimmunoassay,cLEIA)属酶免疫分析,只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同:以酶标记生物活性物质进行免疫反应,免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光,用发光信号测定仪进行发光测定。目前常