体内PARP抑制剂筛选

PARP (poly ADP-ribose polymerase)是存在于多数真核细胞中的一个多功能蛋白质翻译后修饰酶。当DNA损伤时，PARP能以NAD+依赖的形式催化多聚ADP核糖往自身以及邻近的组蛋白等核蛋白聚合，从而参与到DNA碱基切除修复的一系列事件中。当胞内的NAD+库大量消除时，将引起PARP介导的坏死诱导，其中PARP-1的剪切则通过阻止DNA修复以及阻断坏死的能量供应来促使凋亡，实验证明，抑制PARP可以防止心肌和神经缺血、糖尿病、败血病、中风等疾病中的组织损伤，甚至有助于肿瘤治疗中的化疗、放疗增敏。

PARP参与到DNA碱基切除修复的一系列事件中。严重的胞内NAD+库的消除将引起PARP介导的坏死诱导，然而PARP-1的剪切则通过阻止DNA修复诱导的存活以及阻断坏死的能量供应来促使凋亡。此外，抑制PARP可促进肿瘤的化疗和放疗敏感。鉴于不同个体和细胞内PARP活性检测的必要性，Trevigen创新性的开发了高通量PARP体内药理动力学II代试剂盒，用来检测组织和细胞提取液中PAR的水平，并用于记录肿瘤裂解液、器官间PAR水平的差异。

Trevigen 高通量通用PARP分析试剂盒通过检测96孔板上生物素标记的多聚ADP核糖聚合到邻近组蛋白的反应，从而确定已知的或可能的PARP抑制剂。该试剂盒开发了预包被PAR单克隆抗体的96孔板作为捕获抗体，能够捕获到细胞内的PAR和PAR结合蛋白，用抗-PAR多克隆兔源抗体作为检测抗体孵育，用HRP标记山羊抗兔与之特异性结合，化学发光法HRP底物产生检测信号，其光强度单位（light units，RLU)即反映了细胞内PAR水平。

本试剂盒特点：

1、化学发光法检测，无放射性；

2、预包被的96孔抗体捕获板；

3、高信号率；

4、2 pg/ml PAR的检测灵敏度；

5、宽至1,000 pg/ml的线性动态范围；

6、降低了分析间的变异性；

7、合理检测体内以及体外环境中药物对PARP作用。