先天性长QT综合征相关HERG基因细胞株的建立及其蛋白质表达

[摘要] 　目的:建立稳定的先天性长QT 综合征相关HERG基因的细胞株,并观察其蛋白质表达。方法:原核克隆载体PGEM2HERG经限制性内切酶获得HERG cDNA , 将HERG cDNA 亚克隆到真核表达载体pcD2NA3 中,用Lipofectamin2000 转染试剂介导pcDNA32HERG及荧光真核表达载体PRK52GFP 共转染至HEK2293 细胞,利用G2418 进行细胞筛选,并用稀释法建立稳定的HEK2HERG细胞株,用细胞免疫荧光化学法及蛋
白免疫印迹法(Western2blot) 检测基因的蛋白质表达。结果:建立的HEK2HERG细胞株稳定传代, 细胞免疫荧光化学法及Western2blot 法检测到了HERG通道蛋白质的表达。结论:该方法可成功建立HEK2HERG细胞株并表达HERG通道蛋白质,为今后突变型HERG基因的研究提供了细胞基础。