免疫球蛋白抗血清制备方法

免疫球蛋白抗血清制备方法
此法用于制备间接法抗抗体。因抗原为可溶性，故多需加佐剂。
（1）淋巴结注射法
1）选择体重2～3Kg的健康雄性家兔（ 2只以上），编号；
2）在家兔两后脚掌共注射活卡介苗，50mg（约0.6mL．每只足庶部皮下0.1mL，皮内0.2mL）。7～10d后，鼠或国窝处淋巴结肿大如黄豆或蚕豆大小；
3）用二指固定肿大之淋巴结，两侧淋巴结各注射加有完全佐剂的抗原o．5mL，共1mL。事先将抗原稀释为 5～10mg/ml，在免疫前一日加入青、链霉素，使青、链霉素的浓度分别为1000U/mL和1000mg／mL。4℃，次日取出与佐剂混合成乳剂。许多单位用两个注射器分别吸取佐剂与抗原，中间用细胶管连接，相互推进若干次，达到乳化目的；
4）10～14d后，于两侧淋巴结各注射加有完全佐剂的抗原0.25～0.5mL（这一次也可以省略）；
5）7d后，于两侧淋巴结各注射加有不完全佐剂的抗原0.25～0.5mL；
6）试血：第三次免疫后7～10d，耳静脉取少量血，分离血清，用双扩散法，中间孔加抗原（1mg/mL），周围孔加不同稀释度的待检抗血清，37℃、 24h，观察结果，效价在1︰16以上，或者中间孔加抗血清，周围孔加不同稀释倍数的抗原。效价达4000倍以上即可应用；
7）放血：效价合格后即可放血。放血前停食12h。动物仰卧固定，颈部剪毛消毒，切开皮肤lOcm，找到颈动脉，将颈动脉和迷走神经剥离。选择血管中段，用两止血钳夹住（约 5cm），切开，放血（2500g重家兔可放血lOOmL）；
8）分离血清：血液放于大试管、平皿或三角瓶中，凝固后，用铂耳或无菌滴管沿边缘剥离，先故37122h，再放4℃，使血清充分析出。离心沉淀，鉴定合格，冰箱保存备用。