关于绿色荧光蛋白的发展历史介绍

　　1962年，已经有文献报道科学家从多管水母属的发光型水螅水母（luminous hydromedusan Aequorea）中提取到了具有生物发光性质的蛋白质也就是绿色荧光蛋白。到了上世纪70年代，对生物发光的现象才有了一些新的进展。有科学家研究了多管水母属生物发光系统的分子内能量转移。到了九十年代初，科学家才克隆到GFP的cDNA，并且研究了其表达的氨基酸序列，发现 gfp 10 cDNA 编码238个氨基酸肽段。研究A. victoria GFP 基因克隆，发现GFP基因上面有三个限制性酶切位点。这对后续科学家了解其结构有很大的帮助。

　　1994年2月，M. Chalfie 等人创造性的将GFP分别在Escherichia coli和Caenorhabditis elegans细胞中表达，并得出结论由于GFP发光并不需要其他底物或者共同作用因子，所以GFP的表达可以用来在活体中监测基因表达和蛋白质的定位。从那以后的一段时间内，有无数的研究者投入到GFP相关的研究。就在 M. Chalfie 的报道过去一个月左右，Tsuji 等人就在E. coli中融合表达了GFP 蛋白，并且 GFP 在生物体中的激发光谱和发射光谱与自然条件下没有明显区别。由于 GFP 在生物体中的荧光强度不够强，因此很难应用到实际的科学研究中。1995年，Tsien 等人提升了 GFP 发光强度，极大的推动了 GFP 在生物学研究的应用。紧接着在1996年8月 F. Yang 等人就解析出了GFP的分子结构，GFP蛋白是圆桶状，由11个β-折叠形成外周，里面有一个α-螺旋，圆桶的两端是一些不规则卷曲。同年9月，Tsien 等人就解析出了GFP的晶体结构，并阐明其发光原理。还有一些科学家通过制造突变体来筛选更优的GFP，比如：对pH敏感的GFP、专门应用于植物细胞研究的GFP，等等。除了优化GFP之外，很多科学家开拓思维，将GFP蛋白的应用推广到很多研究领域，2002年，David A. Zacharias 等人就将GFP蛋白应用到膜蛋白的研究。同年，GFP蛋白甚至被做成了Zn生物探测器。