关于考马斯亮蓝测定含量的介绍

　　1、考马斯亮蓝测定含量的简介：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果，如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。

　　2、考马斯亮蓝测定含量的浓染液：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL 85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000mL，此染液放4℃至少6个月保持稳定。

　　3、考马斯亮蓝测定含量的样本准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之间绘制标准曲线。

　　4、考马斯亮蓝测定含量的溶解：将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。

　　5、考马斯亮蓝测定含量的稀释：按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

　　6、考马斯亮蓝测定含量的作用：每个样本加5mL稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min。

　　7、考马斯亮蓝测定含量的计算：根据标准曲线计算待测样本的浓度。