关于金属硫蛋白的提取方法介绍

　　1、主要试剂：

　　三羟甲基氨基甲烷（简称Tris）；5，5-二硫二（2-硝基苯甲酸）（简称DTNB）；PBS缓冲溶液。

　　2、动物的处理：

　　参考Onsaka等的方法，给家兔皮下注射ZnSO44次，第1天注射60mg/只（约15mg Zn/kg），第2、4天注射90mg/只，第7天注射120mg/只，第8天处死动物取其内脏。

　　3、金属硫蛋白粗制品的制备：

　　1）称重：将前一夜放-4℃冰箱中解冻的试样拿出来用托盘天平称重，试样重量M，精确到0.1g；

　　2）搅碎：将试样用剪刀剪成碎片后，用捣碎机捣约30～50s，捣成匀浆；

　　3）提取：加入相当于试样重量两倍体积的0.02MTris-HCl，用磁力搅拌器搅约半分钟；

　　4）变性：加入等体积氯仿：乙醇（0.08：1）变性除杂蛋白，搅拌约5分钟；

　　5）离心：5000rmp、4℃离心25min，弃沉淀，取上清；

　　6）热变性：75℃热变性3～5min除杂蛋白；

　　7）过滤：用冰块速冷后用8层纱布过滤，取清液，静置约2h；

　　8）离心：8000rmp、4℃离心25min，弃沉淀，取上清，得到匀浆液。

　　9）层析、冻干：对匀浆液进行层析，然后收集富含MT的层析液进行冻干即得MT粗品。