关于ELISA样本值低于空白值的问题

在ELISA实验中，样本值低于空白值是一个经常性的问题。当样本值较低接近试剂盒的灵敏度就容易发生样本值低于空白值的现象，特别是在血清和血浆样本的检测。究其原因，主要在于两个方面，一方面是误差，另一方面是基质效应。下文逐个分析不同影响因素的原理、和解决方案。

一、误差 Error

误差分为三类，系统误差、随机误差和过失误差。这三类误差中，系统误差对样本值和空白值之间的差异无影响。ELISA样本值低于空白值在误差方面主要来源于随机误差和过失误差。

二、基质效应 Matrix Effect

分析中，基质指的是样本中被分析物之外的组分，基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响分析结果的准确性，这些影响和干扰被称为基质效应。ELISA试剂盒在开发过程中，标准品不能采用人或动物血清、血浆作为标准曲线的稀释液，只能采用其模拟物。模拟物与被测样本在蛋白丰度、复杂性、pH等因素都会存在差异。当样本的基质与其模拟物相比，降低抗原抗体的结合，便产生了样本值低于空白值的现象。造成样本值无法计算出数值，或者数值为负。

目前最常用的去除基质效应的方法是，通过已知分析物浓度的标准样品，同时尽可能保持样本中的基质不变，建立一个校正曲线（Calibration Curve）。

当单个样本或少量样本值低于空白值时，可能是误差原因，这时应增加重复，提高操作技能。当大量样本都低于空白值时，应考虑基质效应的影响，建立校正曲线予以修正。