单克隆抗体的纯化实验

实验材料 蛋白质

试剂、试剂盒 Tris腹水液宁酸盐缓冲液甘氨酸乙酸盐缓冲液

仪器、耗材 超滤器滤膜

实验步骤

1.  将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。

2.  腹水浓稀释于3倍体积的Tris缓冲液，以1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。

3.  依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所收集蛋白体积的1/4。

4.  采用ELISA法检测抗原特异性MAb。

5.  在超滤器中浓缩所分离的单克隆抗体到1~5  mg/ml，所用超滤膜为XM50，将单克隆抗体存于-20℃。