同源重组法构建多功能农药降解基因工程菌研究

摘　要　构建遗传稳定的多功能农药降解基因工程菌可以为农药污染的生物修复提供良好的菌种资源,然而,构建遗传稳定且不带入外源抗性的基因工程菌是一个难点。通过以受体菌的16S rDNA 为同源重组指导序列、sacB 基因为双交换正筛选标记构建同源重组载体,二亲结合的方法将甲基对硫磷水解酶基因( mpd) 整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp. CDS21 染色体的16S rDNA 位点,分别成功构建了含1 个和2 个mpd 基因插入到rDNA 位点且不带入外源抗性的基因工程菌株CDS2mpd 和CDS22mpd。同源重组单交换的效率为317 ×10 - 7～618 ×10 - 7 。通过PCR 和Southern 杂交的方法验证了同源重组事件。基因工程菌遗传稳定,能同时降解甲基对硫磷和呋喃丹。甲基对硫磷水解酶(MPH) 的比活在各生长时期均高于原始出发菌株,比活最高达6122 muPμg。